自從Warren和Mashall從人胃粘膜中分離出幽門螺桿菌（Helicobacter pyloi,Hp)以來，國內外大量的研究資料表明它與非自身免疫性慢性胃炎和十二指腸潰瘍病關系密切。對該菌的免疫學研究也已有不少進展，這對弄清其致病機制、診斷和治療均有重要意義。我們僅就近年來國外對Hp的免疫學研究現狀作一綜述。
1 局部和系統(tǒng)免疫
Hp做為一種致病菌，可引起人體特異性和非特異性免疫反應。Wyatt等應用免疫過氧化物酶染色法研究了非潰瘍性消化不良病人Hp感染時的局部免疫反應，在所有活動性胃炎病人及部分非活動性胃炎病人均可見細菌被IgA包裹，并且發(fā)現IgG和IgM包裹和胃炎的活動性有關。被包裹的細菌多位于粘膜表面，位于胃小凹深部的有些細菌則未被包裹，從而提示這一部位的細菌可以保存下來，免受抗體的傷害。
Kazi等用免疫過氧化物酶染色法對53塊胃竇活檢標本進行了細胞和體液免疫反應的研究，發(fā)現Hp相關性胃炎與無菌的慢性胃炎和正常對照間有明顯差異。IgA、分泌成分和補體C3包裹的細菌可見于所有慢性活動性胃炎病人。C3總是與IgA、IgM或兩者共同包裹有關，這種現象罕見于沒有中性多形核粒細胞浸潤的病人，在26例Hp相關性慢性胃炎中，有18例出現上皮內單個核細胞浸潤。這些上皮內單個核細胞對T淋巴細胞和組織細胞染色陽性。研究結果提示Hp相關性慢性胃炎時的細胞和體液免疫均顯著增強。
Attar等用免疫組化技術研究了21例胃炎的胃粘膜活檢標本，發(fā)現Hp陽性胃炎組的總T細胞和抑制性T細胞出現例數的比率顯著高于該菌陰性組；輔助性T細胞的檢出率、自然殺傷細胞的存在與否和B細胞的分布在2組間無差異；粘膜中的IgA，IgG，IgM漿細胞出現于所有病人，但3種產生免疫球蛋白的漿細胞有較高的密度在Hp陽性胃炎則高于陰性者。研究表明有Hp陽性胃炎胃粘膜中漿細胞有較高的密度，且炎癥主要是由于過多存在的總T細胞尤其是抑制T細胞所介導，結果提示：Hp在胃粘膜中既引起體液免疫反應，又引起細胞免疫反應。
Das等比較了不同來源的人血清對Hp的調理素活性， 發(fā)現不論是沒有胃炎或消化性潰瘍病癥狀的對照組或是分離出或未分離出Hp的有癥狀病人的血清，對Hp有同樣好的調理素作用。同時發(fā)現調理素作用取決于補體激活的旁路途徑而不取決于抗體。上述發(fā)現提示：特異性抗體并無防御Hp的作用，血清中抗體僅具有診斷價值。
Bernatowska等用化學熒光系統(tǒng)和電鏡檢查法研究了三種不同彎曲菌和Hp對中性粒細胞的調理素作用，發(fā)現胎兒彎曲菌、結腸彎曲菌和空腸彎曲菌的調理素作用是由抗體介導，由補體增強，而對Hp的吞噬作用則由于它能直接激活補體活化的經典途徑而不需要抗體。我們認為這一不尋常的特性在Hp相關性胃炎和十二指腸潰瘍的發(fā)病機理中可能起重要作用。
2 細胞毒性因子
現有資料提示：Hp可能分泌有一種或多種可使細胞發(fā)生變性的細胞毒性因子，這在其致病機理中可能具重要作用。Cover和Blaser于1989年在Hp的肉湯培養(yǎng)上清液中發(fā)現一種能使培養(yǎng)細胞發(fā)生空泡變性的細胞毒素，并證明這個Mr132000的細胞毒素相關性蛋白在活體內可為Hp感染的病人所識別。他們推測這種蛋白質的表達可能在消化性潰瘍病的發(fā)生機理中起重要作用。
Figura檢驗了77株Hp細胞毒素產生情況，其中24株來自消化性潰瘍�。ê吐晕秆�)病人，53株來自慢性胃炎但無潰瘍的病人，前者有16株（66.6%)、后者亦有16株（30.1%)產生細胞毒素。兩者間差異有顯著性，提示該毒性物質在消化性潰瘍病的發(fā)生上起著病因學作用。Morgan給3窩小豬分別口服2株產毒和1株非產毒的Hp，僅產毒株在胃粘膜中定居并出現炎癥、粘液減少、細胞內空泡形成和免疫反應，Hp的細胞毒性因子可能是其致病的重要因素。
3 單克隆抗體的制備
國外已有數篇Hp單克隆抗體研制成功的報道。Negrini等把從培養(yǎng)皿中分離的6株Hp混合后免疫小鼠，32d后將小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞P3X63.Ag8.653融合，細胞融合懸液于96孔板上培養(yǎng)生長雜交瘤細胞集落，用整個Hp作靶細胞的間接ELISA法篩選抗體，共獲得21株陽性單克隆抗體，其中以CB-26為最好。
研究證明單克隆抗體CB-26具有很強的特異性，它不與人紅細胞、粒細胞、胃竇腺細胞和胃小凹細胞起反應，也不與非彎曲菌屬的Gram陰性菌、甚至空腸、結腸和胎兒彎曲菌起反應。作者等還對60名經內鏡檢查的病人鑒定 了單克隆抗體CB-26辨認胃粘膜刷片中Hp的能力。用間接過氧化物酶染色法在所有32名培養(yǎng)陽性病人中均觀察到大量Hp，而在28名培養(yǎng)陰性的病人中也有8例觀察到少量細菌，可能是這些病人的活檢標本中細菌量過少，不足以培養(yǎng)出來的緣故。這些研究提示單克隆抗體CB-26可能在Hp的快速和特異性檢出中具有較高的價值。
4 尿素酶的分子結構
Hp是突出的特點之一是具有活性很高的尿素酶，有人認為它同該菌的致病性和耐酸能力有關，而尿素酶的分子結構則與其免疫學特性密切相關。
Hu和Mobley研究了尿素酶的分子結構，將經柱層析純化的尿素酶進行分析，證明純化的尿素酶所占Hp菌體粗提取物可溶性蛋白5.9%,Mr為550 000,由兩個Mr分別為66 000和29 500的亞單位組成,兩者在分子中的比例約為1:1，6對這樣的亞單位構成一個基本的酶分子。并推測Hp強大的尿素酶活力是由于大量的尿素酶分子作用的結果，而不是單一酶分子活性特別高。
N-末端分析顯示29 500亞單位氨基酸順序上同刀豆尿素酶亞單位的氨基末端以及奇異變形桿菌和摩氏摩根菌（Morganella morganii)尿素酶3個亞單位中最小者具有很高的相似性。66 000亞單位同奇異變形桿菌、摩氏摩根菌和產生氣克雷白桿菌尿素酶3個亞單位中最大者具有相似的內順序（氨基酸271～285)。再者，摩氏摩根菌和刀豆的尿素酶亞單位可被Hp66000亞單位的特異性抗血清所識別。從而表明至少有部分相同的抗原決定簇留在不同種系的尿素酶中。
目前國內外已有用粗制尿素酶提取物做ELISA的包被抗原檢測血清中的Hp抗體。由于分子結構的相似性及存在相同的抗原決定簇，用尿素酶提取物作抗原在臨床上診斷Hp感染，有可能同含有尿素酶的其他菌群發(fā)生交叉反應，如泌尿道菌群等。但這種交叉是否嚴重到影響臨床診斷、以及交叉頻度、范圍等問題，尚有待進一步的研究。
5 免疫學診斷方法
自從發(fā)現Hp后，血清學診斷方法迅速出現，并不斷得到改進。早期應用的是血凝法和補體結合法，目前應用較多的是ELISA法。更精確的蛋白印跡法雖然能查出多種多樣的人體全身抗原抗體反應，但并不適于流行病學調查。
作為常規(guī)應用的抗原選擇仍存在問題，理想的抗原應具備以下特點：①特異性強；②致免疫性高；③制備容易；④貯存穩(wěn)定。早期的抗原制備如全菌超聲粉碎抗原，由于含有多種抗原包括鞭毛蛋白，特異性差，可同其他菌種如空腸彎曲菌起反應。酸提抗原或超速離心全菌上清液是更純化的制備，使ELISA的結果更可靠。
應用Hp特有的蛋白質如尿素酶作為測定的基礎是另外一個可行的途徑。其特異性雖好但蛋白印跡法顯示在不同人對每一個別抗原有顯著不同的反應，即對某一單一抗原試驗并非所有人都反應強烈，這種測定較之應用大范圍的多種抗原雖然特異性強，但敏感性低。因此血清學檢測仍有待進一步研究和改進。
6 分子免疫學
Clayton等于1989年首次在大腸桿菌內構建了Hp的DNA基因庫。他們篩選出一株能同特異性抗血清反應的陽性克�。é胏p2)。該克隆的表達產物系Mr66 000的多肽片斷。免疫印跡分析多肽能同特異性Hp抗血清反應。將該DNA提取物經內切酶分析顯著該DNA尚含有一個17 000的DNA除編碼Mr66 000的蛋白外，尚可編碼Mr31 000的蛋白質抗原。免疫印跡顯示在大腸桿菌中表達的這些抗原同在Hp菌體的抗原具有相同的Mr，并存于所有Hp菌株內。點雜交和間接免疫熒光染色證實由這些多肽產生的抗血清僅同Hp反應。表達這些抗原的DNA經用32p標記顯示僅能同Hp菌株雜交。用親和純化的尿素酶多克隆抗體的免疫印跡顯示這些克隆的抗原是尿素酶分子的一部分，但并無尿素酶活性。
用上述DNA探針和重組DNA表達Hp特異性抗原對探知無法培養(yǎng)的Hp，如唾液、糞便中細菌，探討其致病機理和血清學診斷會有較大幫助。一旦篩選出的DNA克隆能夠表達出特異性強、致免疫性高的抗原后，將會在臨床應用中發(fā)揮更大的作用。
丁松澤 賈博琦
北京醫(yī)科大學第一醫(yī)院胃腸科（北京 100034)
