。ǘ)PCR/SSO技術(shù)
此法乃用人工合成的HLA型別特異的寡核苷酸序列作為探針,與待檢細(xì)胞經(jīng)PCR擴(kuò)增的HLA基因片段雜交,從而確定HLA型別,PCR技術(shù)可將HLA復(fù)合體上指定基因片段特異性地?cái)U(kuò)增5~6個(gè)數(shù)量級(jí);而專門設(shè)計(jì)的SSO(序列特異的寡核苷酸sequencedpecific oligonucleotide)探針又能探測(cè)出等位基因間1~2個(gè)核苷酸的差異,故PCR/SSO技術(shù)具有靈敏度、特異性強(qiáng)、需樣本量少等優(yōu)點(diǎn)。
。ㄈ)PCR/SSP技術(shù)
目前常規(guī)的HLA-DNA分型技術(shù),包括上述的PCR/RFLP、PCR/SSO等,最終均需用標(biāo)記的特性探針與擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雜交,再分析結(jié)果。PCR/SSP方法用乃設(shè)計(jì)出一整套等位基因組特異性引物(sequence specific primer,SSP),借助PCR技術(shù)獲得HLA型別特異的擴(kuò)增產(chǎn)物,可通過電泳直接分析帶型決定HLA型別,從而大大簡化了實(shí)驗(yàn)步驟。醫(yī)學(xué)全在線www.med126.com
由于傳統(tǒng)方法在Ⅱ類抗原分型方面困難較大,故上述幾種基因分析型方法目前主要用于Ⅱ類基因座。此外,目前已建立的HLA基因分型技術(shù)還包括PCR單鏈構(gòu)像多態(tài)性分析(PCR-single strand conformational polymorphism,PCR-SSCP)和PCR 異源二聚體電泳多態(tài)即PCR指紋圖(PCr fingerprinting)分析。DNA分型技術(shù)的應(yīng)用,使HLA型別分析達(dá)到了更精細(xì)的水平,并因此發(fā)現(xiàn)了更多的HLA多態(tài)性。HLA的DNA分型技術(shù)現(xiàn)已成為血清學(xué)方法的競爭者,并可能在不久的將來完全取而代之。
HLA是目前所知人體最復(fù)雜的遺傳多態(tài)性系統(tǒng)。HLA研究涉及免疫學(xué)、生物學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等多個(gè)學(xué)科,并已發(fā)展成為一個(gè)獨(dú)立的學(xué)科分支。迄今HLA研究已達(dá)到相當(dāng)深入的水平,并在諸多方面取得顯著進(jìn)展,包括HLA復(fù)合體結(jié)構(gòu);HLA分子結(jié)構(gòu)及其表達(dá)的調(diào)控;HLA分子功能,尤其是在抗原處理、呈遞及T細(xì)胞識(shí)別中的作用;HLA的DNA分型及多態(tài)性研究;HLA與疾病的關(guān)系;HLA與移植的關(guān)系等。HLA研究不僅使器官移植成為一種極有價(jià)值的治療手段,并給基礎(chǔ)與臨床免疫帶來了突破性進(jìn)展。已經(jīng)證實(shí),HLA復(fù)合體中存在控制免疫應(yīng)答的基因以及HLA參與約束免疫細(xì)胞間相互作用,這表示HLA涉及生命活動(dòng)的各個(gè)水平與多個(gè)方面?梢灶A(yù)期,對(duì)HLA的研究將繼續(xù)成為免疫遺傳學(xué)最活躍的部分;對(duì)HLA的應(yīng)用將擴(kuò)展到基礎(chǔ)、臨床、預(yù)防醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。