精蛋白重組人胰島素注射液—重組人胰島素的測定—效價測定

本方法采用高效液相色譜法測定精蛋白重組人胰島素注射液中重組人胰島素的含量。

本方法適用于精蛋白重組人胰島素注射液。

供試品制成鹽酸溶液，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長214nm處檢測重組人胰島素的吸收值，計算出其含量。

1. 異丙醇

2. 0.2mol/L硫酸鹽緩沖液

3. 0.01mol/L鹽酸溶液

4. 9.6mol/L鹽酸溶液

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑（5-10μm)。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：乙腈＋硫酸鹽緩沖液=26＋74

2.2 檢測波長：214nm

2.3 柱溫：室溫

1. 0.2mol/L硫酸鹽緩沖液

無水硫酸鈉28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7mL、水800mL，用乙醇胺調(diào)節(jié)pH值至2.3，加水至1000mL。

2. 稱取供試品

精密量取本品適量。

3. 對照品溶液的制備

精密稱取重組人胰島素對照品適量，用0.01mol/L鹽酸溶液制成每1mL含1.0mg的溶液，并室溫放置至少24小時。

4. 供試品溶液的制備

供試品每1mL中加9.6mol/L鹽酸溶液3μL，使其完全澄清，精密量取適量，加0.01mol/L鹽酸溶液定量稀釋成每1mL含10單位的溶液（臨用新配)，混勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長214nm處測定重組人胰島素的吸收值，計算出其含量。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.416。