方法名稱： |
注射用雙黃連（凍干)—綠原酸和咖啡酸的測(cè)定—高效液相色譜法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用高效液相色譜法測(cè)定注射用雙黃連（凍干)中綠原酸和咖啡酸的含量。 本方法適用于中藥制劑注射用雙黃連（凍干)。 |
方法原理： |
供試品于容量瓶中，用含內(nèi)標(biāo)物的流動(dòng)相溶液溶解定容，過(guò)濾，濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)274nm處檢測(cè)綠原酸和咖啡酸的吸收值，計(jì)算出其含量。 |
試劑： |
1.甲醇（色譜純) 2 .醋酸 3. 磷酸氫二鈉 4 .水楊酸 |
儀器設(shè)備： |
1 儀器 1.1 高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 ERC-ODS-1161色譜柱（100×6mm)。 1.3 紫外吸收檢測(cè)器 2 色譜條件 2.1 流動(dòng)相：甲醇 10%磷酸氫二鈉的醋酸緩沖液（取磷酸氫二鈉1.43g，加入醋酸4.58mL后，用水稀釋至1000mL，即得pH=2.7的磷酸氫二鈉的醋酸緩沖液)= 10 90 2.2 內(nèi)標(biāo)物：水楊酸 2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm 2.4柱溫：55℃ |
試樣制備： |
1. 稱取供試品 精密稱取本品粉末（過(guò)五號(hào)篩-80目)試樣10mg。 2. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸和咖啡酸各10mg，分別于100mL量瓶中，用甲醇溶解定容，即配成100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。 3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取綠原酸的儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋100倍，配成濃度為1mg/L的溶液，然后分別取稀釋液0.1，0.5，1，2mL，減壓下?lián)]去溶媒，加入含有內(nèi)標(biāo)物的流動(dòng)相1mL，充分溶解后作為綠原酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 另取咖啡酸的儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋200倍，配成濃度為0.5mg/L的溶液，然后分別取稀釋液0.4， 1，2，4mL，減壓下?lián)]去溶媒，加入含有內(nèi)標(biāo)物的流動(dòng)相1mL，充分溶解后作為咖啡酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 4.供試品溶液的制備 將供試品置于10mL容量瓶中，用含內(nèi)標(biāo)物的流動(dòng)相溶液溶解并稀釋至刻度，過(guò)濾，取續(xù)濾液為供試品溶液。 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)274nm處測(cè)定綠原酸和咖啡酸的吸收值，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。 2. 供試品的測(cè)定 精密吸取上述供試品溶液20μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)274nm處測(cè)定綠原酸和咖啡酸的吸收值，計(jì)算出其含量。 |
參考文獻(xiàn)： |
何心，石春偉，蘆秋萍等. 高效液相色譜法測(cè)定雙黃連粉針中綠原酸和咖啡酸的含量. 藥物分析雜志，1997，17（6)：410-411. |
