| 公開(公告)號 | CN1257180C |
| 公開(公告)日 | 2006.05.24 |
| 申請(專利)號 | CN02139818.6 |
| 申請日期 | 2002.12.11 |
| 專利名稱 | 采用氨基化二氧化硅殼磁性納米顆�？焖俪樘峒兓疍NA的方法 |
| 主分類號 | C07H21/04(2006.01)I |
| 分類號 | C07H21/04(2006.01)I;C07H1/08(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 湖南大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 王柯敏;何曉曉;李 杜;譚蔚泓;黃杉生;林 霞 |
| 地址 | 410082湖南省長沙市河西岳麓山湖南大學化學化工學院 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 湖南兆弘專利事務所 |
| 代理人 | 趙 洪 |
| 國省代碼 | 湖南;43 |
| 主權項 | 一種采用氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒快速抽提純化DNA的方法，其特征在于：以帶正電荷且具磁性的氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒為載體，直接與組織裂解液或細胞裂解液相互作用，帶正電荷的氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒與組織裂解液或細胞裂解液中帶負電荷的DNA通過靜電作用形成納米顆粒-DNA復合物，在外磁場的作用下實現納米顆粒-DNA復合物與組織裂解液或細胞裂解液的分離，再通過解離液將結合在納米顆粒表面的DNA解離下來，從而實現對DNA的抽提純化；所述的氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒用以下方法制得：第一步首先制備納米四氧化三鐵膠體，即將現配的20mL1mol/L三氯化鐵水溶液與5mL2mol/L的二氯化鐵溶液混合，其中2mol/L的二氯化鐵溶液用2mol/L鹽酸配制，加入250mL0.7mol/L的氨水，室溫下攪拌半小時后，用磁鐵分離，倒掉上清液，所得沉淀用30mLlmol/L四甲基氫氧化銨溶解，然后加入二次蒸餾水至250mL，用孔徑為40-80μm的砂芯漏斗過濾，除去聚集的大顆粒；第二步：將體積比為4.2∶1∶1的環(huán)己烷、表面活性劑曲拉通X-100和正己醇混合均勻，加入360μL水作為分散相，攪拌5min后形成油包水的微膠囊，加入200μL納米四氧化三鐵膠體，攪拌均勻；再將體積比為1∶1的100μL正硅酸乙酯和100μLN-(β-氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅烷混合均勻后加入到微膠囊體系中，攪拌均勻后，加入100μL的氨水催化它們在微膠囊中的同步水解，整個反應時間為24小時，反應完備后用丙酮破乳，在外磁場下收集顆粒，即可制備氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒。 |
| 摘要 | 采用氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒快速抽提純化DNA的方法，以帶正電荷且具磁性的氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒為載體，直接與組織裂解液或細胞裂解液相互作用，帶正電荷的氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒與組織裂解液或細胞裂解液中帶負電荷的DNA通過靜電作用形成納米顆粒-DNA復合物，在外磁場作用下實現納米顆粒-DNA復合物與組織裂解液或細胞裂解液的分離，再通過解離液將結合在納米顆粒表面的DNA解離下來，從而實現DNA的快速抽提純化。該方法不需用酚/氯仿抽提法除去核酸溶液中的蛋白質，簡化了步驟，提高了效率，同時免去酚/氯仿對環(huán)境的污染和對人體的毒害作用；該方法為基因轉導、突變檢測、基因診斷和治療等研究和應用中DNA的純化提供了一種新手段。 |
| 國際公布 |
