| 公開(公告)號(hào) | CN1323157C |
| 公開(公告)日 | 2007.06.27 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510104832.9 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.09.23 |
| 專利名稱 | 冬蟲夏草菌的一種仿生學(xué)培養(yǎng)方法 |
| 主分類號(hào) | C12N1/14(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N1/14(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 田向榮 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 田向榮;田紹進(jìn);劉彥威;蘇敬良;韓 博 |
| 地址 | 100096北京市海淀區(qū)西三旗育新小區(qū)12-1806 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京安博達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 徐國(guó)文 |
| 國(guó)省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種冬蟲夏草菌的仿生學(xué)培養(yǎng)方法，其特征在于，以所述菌的菌絲段細(xì)胞或組織進(jìn)行液體靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)過程包括以下步驟：培養(yǎng)基配置，菌絲段的接種，菌絲段的收獲，培養(yǎng)過程中溫度為10-20℃，壓力為常壓，光強(qiáng)為室內(nèi)自然光，所述的菌絲段細(xì)胞或組織是由無菌的單個(gè)子囊孢子萌發(fā)所形成的，其中單孢子分離步驟為： (一)采集蟲草菌種 采挖子實(shí)體粗壯飽滿、可妊部發(fā)育明顯的冬蟲夏草完整菌蟲復(fù)合體， 放入13-16℃培養(yǎng)箱中養(yǎng)護(hù)，保持合適的濕度， (二)子囊孢子的收集和萌發(fā) 清除子實(shí)體表面雜質(zhì)，用無菌蒸餾水沖洗，用75％的酒精進(jìn)行表面消毒，置13-16℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待子囊開始彈射子囊孢子時(shí)，將開始彈射孢子的子實(shí)體伸入滅菌的生理鹽水中，充分洗脫子囊孢子，將洗脫的子囊孢子放在13-16℃培養(yǎng)箱中3-5天，以便萌發(fā)， (三)接種針的制備 用磨刀石將最小號(hào)縫衣針針尖磨鈍，再將頭部?jī)蛇叡M量磨薄，形成小鏟狀，然后套入普通接種棒中固定， (四)單孢子分離和純培養(yǎng) 在無菌操作下，將含有子囊孢子的液體搖勻，倒少量于滅菌的分離培養(yǎng)基平板中，靜置5-10min，待水被吸入瓊脂后，在低倍顯微鏡下用(三)制備的接種針挑取單個(gè)發(fā)芽的子囊孢子，接入滅菌的分離培養(yǎng)基平板中，每個(gè)平板均勻接入6-8個(gè)，將接種部位作好標(biāo)記，放入13-16℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-4天，用消毒手術(shù)刀挖取未污染的帶有子囊孢子的培養(yǎng)基放入新的分離培養(yǎng)基平板中，每平板一株，用膠帶封口防止水分散失，放入13-16℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，45-55天形成肉眼可見的菌落， 其中所述液體靜置培養(yǎng)是指液體深度為1-5cm的淺層液體靜置培養(yǎng)， 所述的菌絲段細(xì)胞或組織每培養(yǎng)一段時(shí)間在無菌條件下用機(jī)械的方法搗碎一次，所述的一段時(shí)間是指一個(gè)月，所述菌絲段細(xì)胞或組織機(jī)械搗碎的程度是單細(xì)胞或多細(xì)胞菌絲段，培養(yǎng)六個(gè)月后收獲。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及冬蟲夏草菌絲體的一種仿生學(xué)培養(yǎng)方法。培養(yǎng)過程包括，單孢子分離及純培養(yǎng)，液體培養(yǎng)基的配置，菌絲體純培養(yǎng)菌種的接種，淺層液體靜置培養(yǎng)，六個(gè)月后收獲菌絲體。培養(yǎng)過程中每一個(gè)月用機(jī)械的方法將菌絲體打碎成單細(xì)胞或多細(xì)胞菌絲段。本發(fā)明的單孢子分離方法得到的純培養(yǎng)，證明是冬蟲夏草菌唯一的無菌型--中國(guó)被毛孢。本發(fā)明的培養(yǎng)方法，不需要發(fā)酵罐、搖床等昂貴設(shè)備的投入，極大的降低了成本。與深層液體發(fā)酵培養(yǎng)相比，1g干菌絲體的生產(chǎn)成本降低50％以上。 |
| 國(guó)際公布 |
