| 公開(公告)號 | CN1766106A |
| 公開(公告)日 | 2006.05.03 |
| 申請(專利)號 | CN200510060786.7 |
| 申請日期 | 2005.09.15 |
| 專利名稱 | 腦鈉肽（BNP)制備方法 |
| 主分類號 | C12N15/09(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/09(2006.01)I;C12N15/16(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;A61K38/22(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 浙江大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 周林福;陳 峰;朱海紅;陳 智 |
| 地址 | 310029浙江省杭州市西湖區(qū)延安路浙大湖濱校區(qū)醫(yī)學(xué)院 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 馮子玲 |
| 國省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項 | 腦鈉肽(BNP)的制備方法，其特征在于以下步驟： (1)采用PCR技術(shù)將表達BNP的目的基因擴增，并純化其產(chǎn)物； (2)將純化的PCR產(chǎn)物于BamHI與HindIII雙酶切后定向插入經(jīng)同樣雙酶切的pet32a，獲得重組質(zhì)粒Pet32a+BNP； (3)將重組質(zhì)粒Pet32a+BNP轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5a，經(jīng)培養(yǎng)擴增，抽提純化，測序分析，獲測序正確的重組質(zhì)粒； (4)將測序正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21DE30菌，在30℃，0.1mMIPTG條件下表達重組蛋白； (5)將表達重組蛋白的活化菌株接種到2-YT培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)，進行搖瓶實驗，工程菌在發(fā)酵罐中高密度發(fā)酵，種子菌按5％比例接種，在低溶氧條件下誘導(dǎo)，放罐，離心得菌體； (6)將離心得到的菌體沉淀進行細(xì)胞裂解，洗滌出包涵體，溶解包涵體，His柱過柱純化。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種腦鈉肽(BNP)的制備方法，為克服傳統(tǒng)提取BNP方法成本高、收率低，目的蛋白容易變性，材料來源有限等諸多缺陷，本發(fā)明在制備BNP過程中，用PCR技術(shù)擴增目的基因，以Pet32a作為載體質(zhì)粒，酶切定向插入BNP目的基因后形成重組質(zhì)粒，以大腸桿菌DH5α，BL21(DE3)作為表達菌株，以His柱作為純化柱子分離純化目的蛋白。這種制備方法既可方便檢測，又可增強重組蛋白的穩(wěn)定性。運用本發(fā)明技術(shù)獲得的BNP通過免疫學(xué)方法制成診斷試劑盒，可快速、準(zhǔn)確、特異地診斷和鑒別診斷許多心血管疾病。 |
| 國際公布 |
