| 公開(公告)號 | CN1793338A |
| 公開(公告)日 | 2006.06.28 |
| 申請(專利)號 | CN200510045185.9 |
| 申請日期 | 2005.11.17 |
| 專利名稱 | 一種大菱鲆鰭細(xì)胞系的構(gòu)建方法 |
| 主分類號 | C12N5/06(2006.01)I |
| 分類號 | C12N5/06(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國海洋大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 樊廷俊;叢日山;耿曉芬;王麗燕;楊秀霞;于秋濤;李明玉;付永鋒 |
| 地址 | 266003山東省青島市市南區(qū)魚山路5號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 張中南 |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項 | 一種大菱鲆鰭細(xì)胞系的構(gòu)建方法，首先將活大菱鲆在加入了濃度均為1000單位/毫升的青霉素和鏈霉素的消毒海水中暫養(yǎng)24小時，取出大菱鲆置70％酒精中浸泡1～2分鐘后，于超凈工作臺內(nèi)無菌剪下背鰭和腹鰭，經(jīng)70％酒精浸泡30～60秒后，用L-15培養(yǎng)液清洗后放入消毒小燒杯中，添加5毫升含5％胎牛血清的L-15培養(yǎng)液，用眼科剪將鰭組織剪成碎塊裝入已消毒離心管中，離心收集沉淀物，用2毫升L-15培養(yǎng)液懸浮均勻，加入2毫升0.5％胰蛋白酶，混勻后酶解20～30分鐘，將胰蛋白酶酶解物裝入已消毒的離心管中，離心收集沉淀物，用2毫升L-15培養(yǎng)液懸浮均勻，加入2毫升1.5％透明質(zhì)酸酶和2毫升0.6％II型膠原酶，混勻酶解1～2小時后裝入已消毒的離心管中，離心收集游離鰭細(xì)胞和疏松組織塊沉淀物，用2毫升大菱鲆鰭細(xì)胞專用增殖培養(yǎng)液，分裝至2個25毫升培養(yǎng)瓶中，正置干貼6小時后，每瓶補加4毫升鰭細(xì)胞專用增殖培養(yǎng)液，置20～22℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔3～5天半量更換大菱鲆鰭細(xì)胞專用增殖培養(yǎng)液一次。 |
| 摘要 | 一種大菱鲆鰭細(xì)胞系的構(gòu)建方法，它是以其胸鰭和腹鰭組織為材料，先將鰭組織剪碎，采用胰蛋白酶和透明質(zhì)酸酶、II型膠原酶分步消化法獲得游離鰭細(xì)胞和疏松組織塊，在含20％胎牛血清、羧甲基殼多糖、N-乙酰葡萄糖鹽酸鹽、氨基葡萄糖鹽酸鹽、人表皮細(xì)胞生長因子、人堿性成纖維細(xì)胞生長因子和牙鲆鰓細(xì)胞培養(yǎng)液的L-15培養(yǎng)液中培養(yǎng)；采用胰蛋白酶消化法進(jìn)行傳代培養(yǎng)。該發(fā)明工藝科學(xué)合理，經(jīng)這種方法所獲得的傳代細(xì)胞目前已傳至第62代。本發(fā)明的大菱鲆鰭細(xì)胞未經(jīng)任何病毒或癌基因轉(zhuǎn)染，可望直接應(yīng)用于相關(guān)理論研究和病毒疫苗的研制。 |
| 國際公布 |
