| 公開(公告)號(hào) | CN100338090C |
| 公開(公告)日 | 2007.09.19 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02155189.8 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.12.17 |
| 專利名稱 | 生長(zhǎng)抑素全合成新方法 |
| 主分類號(hào) | C07K7/64(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C07K7/64(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 常州市第四制藥廠有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 嚴(yán)益民;屠永銳;孫永強(qiáng);馬亞平;鄧金根 |
| 地址 | 213004江蘇省常州市南郊梅龍壩 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 王 巍 |
| 國(guó)省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種生長(zhǎng)抑素全合成方法，其特征在于該方法包括下列步驟：I.程序反應(yīng)生長(zhǎng)抑素線肽合成采用程序反應(yīng)，步驟如下：以Fmoc-Cys(Trt)-2-氯三苯甲基樹脂(Fmoc-Cys(Trt)-resin)為起始固相合成載體，每次通過程序反應(yīng)：第一次與Fmoc-Ser(tBu)-OH反應(yīng)得Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-resin；第二次與Fmoc-Thr(tBu)-OH反應(yīng)得Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-resin；第三次與Fmoc-Phe-OH反應(yīng)得Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-resin；第四次與Fmoc-Thr(tBu)-OH反應(yīng)得Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-resin；第五次與Fmoc-Lys(Boc)-OH反應(yīng)得Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-resin；第六次與Fmoc-Trp-OH反應(yīng)得Fmoc-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-resin；第七次與Fmoc-Phe-OH反應(yīng)得Fmoc-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-resin；第八次與Fmoc-Phe-OH反應(yīng)得Fmoc-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-resin第九次與Fmoc-Asn(Trt)-OH反應(yīng)得Fmoc-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-resin；第十次與Fmoc-Lys(Boc)-OH反應(yīng)得Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-rein；第十一次與Fmoc-Cys(Trt)-OH反應(yīng)得Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-rein；第十二次與Boc-Ala-Gly-OH反應(yīng)得Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-rein；程序反應(yīng)用下列步驟洗滌：(1)用二氯甲烷5-7ml/g洗2次，每次2分鐘；(2)用甲醇5-7ml/g洗2次，每次2分鐘；(3)用20％哌啶/DMF10ml/g洗2次，每次20分鐘；(4)用二氯甲烷5-7ml/g洗3次，每次2分鐘；(5)用甲醇5-7ml/g洗3次，每次2分鐘；(6)加入1-3當(dāng)量Fmoc保護(hù)氨基酸，1-3當(dāng)量HOBt，所述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷與N，N，-二甲基甲酰胺溶解，而后加入1-3當(dāng)量1mol/lN，N，-二環(huán)己基碳酰亞胺/二氯甲烷，機(jī)械攪拌，4小時(shí)；(7)用二氯甲烷5-7ml/g洗3次，每次2分鐘；(8)用甲醇5-7ml/g洗3次，每次2分鐘；II.切割反應(yīng)步驟I程序反應(yīng)得到的合成生長(zhǎng)抑素樹脂線肽采用K試劑切割：將K試劑加入到10ml-30ml/g樹脂中，樹脂立即變?yōu)樽霞t色，冰水浴下機(jī)械攪拌反應(yīng)5小時(shí)后，過濾，并用K試劑洗滌樹脂，加入過量冷乙醚，即析出白色固體，過濾，收集白色固體，余渣用10％醋酸洗滌后，合并，冷凍干燥得線肽；所述K試劑由三氟乙酸、苯甲硫醚、乙二硫醇、苯酚、水組成，它們的體積比為33∶2∶2∶2∶1；III.氧化環(huán)合與純化工藝對(duì)得到的線肽按照1mg/1.5ml的濃度進(jìn)行室溫氧化環(huán)合，氧化溶劑為0.01-1％雙氧水或0.1-5％二甲亞砜水溶液；大于或等于5小時(shí)后，氧化環(huán)合完全；直接上C18填料的中壓色譜柱，所述中壓色譜柱為5-500mg/g填料；先用蒸餾水將雙氧水或二甲亞砜從色譜柱上洗脫，然后，用0-80％MeOH/H2O以及0.1-10％AcOH將產(chǎn)品從色譜柱梯度洗脫，濃縮后，冷凍干燥，一次性可得到除去雙氧水或二甲亞砜的產(chǎn)品，最后通過柱層析純化，用0.2％AcOH/MeOH和0.2％AcOH/H2O洗脫，進(jìn)行二次純化，冷凍干燥得純化產(chǎn)品；IV.交換反應(yīng)制備醋酸生長(zhǎng)抑素(1)將步驟III得到的生長(zhǎng)抑素三氟醋酸鹽溶于10％醋酸中；(2)將此溶液加入到強(qiáng)堿性離子交換樹脂柱上；(3)用10％醋酸水溶液洗脫樣品；收集洗脫液；用茚三酮顯色反應(yīng)進(jìn)行跟蹤；合并洗脫液濃縮、冷凍干燥得醋酸生長(zhǎng)抑素白色固體。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明公開了生長(zhǎng)抑素(14肽)的固相合成新方法。本方法采用2-氯三苯甲基樹脂作固相載體，在該樹脂首先連接保護(hù)半胱氨�；�(Fmoc-Cys(Trt)-)，采用Fmoc保護(hù)氨基酸的程序接肽法完成生長(zhǎng)抑素線肽的合成，用三氟醋酸一次脫除線肽側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)，并切割樹脂，得到生長(zhǎng)抑素線肽的三氟醋酸。該中間產(chǎn)物在雙氧水或二甲基亞砜水溶液中氧化環(huán)合，得到生長(zhǎng)抑素三氟醋酸鹽粗制品。該粗制品經(jīng)C18鍵合硅膠中壓柱，用甲醇-水梯度洗脫方法分離純化，得生長(zhǎng)抑素三氟醋酸精制產(chǎn)品。該產(chǎn)品用醋酸離子交換樹指交換，并冷凍干燥得最終產(chǎn)品。本方法制備生長(zhǎng)抑素具有產(chǎn)率高，合成快，不易消旋，可分子內(nèi)選擇性氧化環(huán)合，純度好，方法簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)�？捎糜诖笈可a(chǎn)制備。 |
| 國(guó)際公布 |
