| 公開(公告)號(hào) | CN1249244C |
| 公開(公告)日 | 2006.04.05 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02812556.8 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.06.19 |
| 專利名稱 | 去除抗生素耐藥性和/或使質(zhì)粒穩(wěn)定的方法，該方法構(gòu)建的載體和轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞及其應(yīng)用 |
| 主分類號(hào) | C12N15/68(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/68(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2001.6.21 SE 0102204-5 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 利夫·艾薩克森;彼得·J·黑格;法黑德·M·阿布達(dá)爾卡里姆 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 利夫·艾薩克森;彼得·J·黑格;法黑德·M·阿布達(dá)爾卡里姆 |
| 地址 | 瑞典烏普薩拉 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | 2002-06-19 PCT/EP2002/006780 |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | 2003.12.22 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京市柳沈律師事務(wù)所 |
| 代理人 | 巫肖南;封新琴 |
| 國(guó)省代碼 | 瑞典;SE |
| 主權(quán)項(xiàng) | 用于去除抗生素耐藥性和/或使質(zhì)粒穩(wěn)定的方法，包括如下步驟： a)構(gòu)建含有為同向重復(fù)序列所包圍的抗生素耐藥性基因的載體，其中所述同向重復(fù)序列可以是沒有互養(yǎng)效應(yīng)的必需基因， b)當(dāng)所述重復(fù)序列并非所述必需基因時(shí)，另外向載體中插入所述必需基因和適宜此必需基因的啟動(dòng)子， c)用a)或b)所得載體轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞， d)去除宿主細(xì)胞中的沒有互養(yǎng)效應(yīng)的染色體必需基因， e)體內(nèi)去除抗生素耐藥性基因， 其中，步驟a)和b)可以用相反的順序完成。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及用于除去抗生素耐藥性和/或使質(zhì)粒穩(wěn)定的方法。本發(fā)明包括構(gòu)建載體的步驟，所述載體含有為同向重復(fù)序列基因所包圍的抗生素耐藥性基因。此同向重復(fù)序列基因可以是一個(gè)必需基因或Rek-序列。在后一種情況中，載體中存在具有適宜啟動(dòng)子的必需基因。用所得的載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，之后去除宿主細(xì)胞中必需的染色體基因并去除細(xì)胞中載體內(nèi)的抗生素耐藥性基因。優(yōu)選的必需基因是infA。本發(fā)明也涉及在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定維持載體的方法，在細(xì)胞中生產(chǎn)DNA的方法和在細(xì)胞中生產(chǎn)氨基酸，肽和蛋白的方法。而且，本發(fā)明還涉及已去除染色體必需基因，并含有下述載體的轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，該載體含有相應(yīng)的必需基因，還可能含有一或多個(gè)所需的基因X。該載體不攜帶抗生素耐藥性基因。本發(fā)明還包括從宿主獲得的載體DNA在制備用于基因治療的藥物組合物，如疫苗中的用途。攜帶含有適宜基因X的載體的細(xì)菌可被用于大規(guī)模生產(chǎn)該基因的基因產(chǎn)物所針對(duì)的化合物。 |
| 國(guó)際公布 | 2003-01-03 WO2003/000881 英 |
