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編碼新的融合蛋白的DNA和通過該DNA的表達來制備有用的多肽的方法

公開(公告)號 CN100338091C  
公開(公告)日 2007.09.19  
申請(專利)號 CN99120748.3  
申請日期 1999.09.25  
專利名稱 編碼新的融合蛋白的DNA和通過該DNA的表達來制備有用的多肽的方法  
主分類號 C07K14/32(2006.01)I  
分類號 C07K14/32(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 伊藤火腿株式會社;鵜高重三  
發(fā)明(設(shè)計)人 佐藤靜治;東久邇真彥;工藤季之;近藤雅昭  
地址 日本兵庫縣  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 中原信達知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司  
代理人 丁業(yè)平  
國省代碼 日本;JP  
主權(quán)項 一種分離的DNA,其能夠在短芽孢桿菌(Bacillusbrevis)中生產(chǎn)外源多肽,包括與芽孢桿菌啟動子區(qū)的核酸序列的3’端連接并且編碼包含線性連接的第一,第二和第三序列的融合蛋白的核苷酸序列,其中所述第一序列的組成為自芽孢桿菌細胞壁蛋白(CWP)N末端開始的n個基酸殘基的序列,其中當外源肽為人前胰島素時,n為6,7,8,10,11,12,15,17,20或50,當外源肽為人胰高血糖素時,n為20,以及當外源多肽為突變?nèi)?a class="channel_keylink" href="/pharm/2009/20090107113123_47580.shtml" target="_blank">生長激素時,n為1-12,14,20或30,第二序列的組成為一個或多個氨基酸殘基用于通過化學或酶法將所述第三序列與所述第一序列切開,所述第二序列在第三序列中不存在,以及第三序列包含的外源多肽序列選自人前胰島素,人胰高血糖素,和在N末端帶有甘氨酸或絲氨酸的突變人生長激素,由此所述第三序列能夠通過化學或酶法僅在所述第二序列處與所述第一序列切開。  
摘要 本發(fā)明涉及一種包含編碼融合蛋白的核苷酸序列的DNA、包含所述DNA的載體、包含所述載體的屬于芽孢桿菌屬的細菌和通過培養(yǎng)所述的細菌來制備有用的多肽的方法,其中所述的融合蛋白包括:由芽孢桿菌的細胞壁蛋白的信號肽序列、用于分離及純化所述融合蛋白的標記序列、接頭序列、由用于化學或酶促裂解的序列、和外源多肽序列;所述的這些序列彼此按序線性連接,所述的信號肽序列、標記和接頭是任選的序列,并且其中所述的核苷酸序列與包含芽孢桿菌啟動子區(qū)的核酸序列的3’-末端相連。  
國際公布  
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