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一類重組基因產(chǎn)生的朊蛋白(PrPC)融合變構(gòu)體及其用途

公開(公告)號(hào) CN1297663C  
公開(公告)日 2007.01.31  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN03130685.3  
申請(qǐng)日期 2003.05.07  
專利名稱 一類重組基因產(chǎn)生的朊蛋白(PrPC)融合變構(gòu)體及其用途  
主分類號(hào) C12N15/62(2006.01)I  
分類號(hào) C12N15/62(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I;A61P31/00(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 中國科學(xué)院微生物研究所  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 田 波;尹少滿;楊懷義  
地址 100000北京市中關(guān)村北一條13號(hào)  
頒證日  
國際申請(qǐng)  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司  
代理人 兆元  
國省代碼 北京;11  
主權(quán)項(xiàng) 一種含有正常朊蛋白基因與酵母朊病毒Ure2p1-65或Sup35p1-114基因的重組基因,所述朊蛋白基因選自人、;蜓螂玫鞍谆颉2.一種由權(quán)利要求1所述的重組基因所表達(dá)的融合變構(gòu)體。3.按照權(quán)利要求1所述的重組基因,其中,酵母朊病毒基因片段融合在正常朊蛋白基因的N端或C端,酵母朊病毒基因片段和正常朊蛋白基因直接融合或加適當(dāng)?shù)倪B接區(qū)。4.權(quán)利要求3所述的重組基因,其中所述的連接區(qū)為八聚甘酸基因片段。5.一種制備權(quán)利要求2所述的融合物變構(gòu)體的方法,包括:1)正常朊蛋白基因與酵母朊病毒Ure2p1-65或Sup35p1-114基因的融合,所述朊蛋白基因選自人、;蜓螂玫鞍谆;2)將1)的基因融合重組片段插入到原核表達(dá)載體pET30a(+)中,在大腸桿菌BL21中表達(dá)、表達(dá)產(chǎn)物用6M鹽酸胍溶解,進(jìn)行Ni親合層析和柱上復(fù)性,以16%SDS-PAGE電泳和考馬斯亮藍(lán)鑒定純度,得到大于95%純度的蛋白,所得組分濃度高于1mg/ml;3)將濃度至少為1mg/ml的重組蛋白在pH4.0-9.0的緩沖液中,0℃-37℃反應(yīng)至少7小時(shí),獲得融合物變構(gòu)體。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的融合變構(gòu)體,在制備蛋白酶消化朊蛋白試劑中的應(yīng)用。7.權(quán)利要求2所述的融合變構(gòu)體,在制備朊病毒的檢測與診斷陽性對(duì)照試劑中的應(yīng)用。  
摘要 本發(fā)明提供了一類由酵母朊病毒結(jié)構(gòu)域與動(dòng)物和人正常朊蛋白基因重組表達(dá)的融合變構(gòu)體,其中正常朊蛋白基因可來自人、牛、羊、鹿、貂、雞、等。酵母朊病毒結(jié)構(gòu)域基因?yàn)閁re2p1-65或Sup351-114。域Ure2p1-65或Sup35p1-114基因的重組及其表達(dá)的融合變構(gòu)體的制備方法。這種融合變構(gòu)體可作為陽性對(duì)照替代品應(yīng)用于瘋牛病等朊病毒病的檢測與診斷,其優(yōu)越性在于避免了用有病腦組織提取物作為陽性對(duì)照造成傳染的危險(xiǎn),以及未發(fā)生瘋牛病等朊病毒病的國家獲得陽性對(duì)照。  
國際公布  
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