| 公開(公告)號 | CN1325639C |
| 公開(公告)日 | 2007.07.11 |
| 申請(專利)號 | CN03134768.1 |
| 申請日期 | 2003.09.29 |
| 專利名稱 | 高純度蚓激酶的制備方法及由其制備的藥物制劑 |
| 主分類號 | C12N9/48(2006.01)I |
| 分類號 | C12N9/48(2006.01)I;A61K38/48(2006.01)I;A61P7/02(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 北京賽生藥業(yè)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 馬 骉;魏化偉;吳 丹;宋夢薇;張 穎 |
| 地址 | 100078北京市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)興盛街8號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京律誠同業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 徐金國;梁 揮 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種高純度蚓激酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)蚓激酶粗品的提取：取鮮活蚯蚓用水洗凈，加入食鹽處理；加入pH6.8～8.3的緩沖液，用膠體磨制備勻漿；將勻漿液反復(fù)凍融；將勻漿液加熱，去除對熱不穩(wěn)定的雜蛋白；將勻漿液離心，取上清液；上清液經(jīng)超濾濃縮，截留分子量為10000～50000道爾頓的組分，冷凍干燥制得蚓激酶粗品；(2)蚓激酶粗品的純化：將步驟(1)中獲得的蚓激酶粗品溶于緩沖液中，離心，取上清液用離子交換層析柱分離，得到蚓激酶活性組分；(3)蚓激酶活性組分的再純化：將步驟(2)中的蚓激酶活性組分用緩沖液溶解，用單克隆抗體親合層析柱進(jìn)行再純化，用緩沖液平衡至流出液在蛋白檢測儀上繪出穩(wěn)定的基線后，再用含有洗脫劑的親和層析洗脫液洗脫，收集活性洗脫峰，冷凍干燥得到高純度的蚓激酶；其中步驟(2)中離子交換層析采用羧甲基葡聚糖凝膠柱或二乙氨基葡聚糖凝膠柱或瓊脂糖凝膠柱層析，先用緩沖液平衡脫洗，再用含有0～0.5mol/LNaCl的緩沖液進(jìn)行梯度洗脫；所述的緩沖液為磷酸鹽緩沖液或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液；步驟(3)中單克隆抗體親和層析柱是由蚓激酶抗體偶聯(lián)到經(jīng)過溴化氰活化處理的羧甲基葡聚糖凝膠、二乙氨基葡聚糖凝膠或瓊脂糖凝膠的多糖基質(zhì)上制得的。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開一種高純度蚓激酶的制備方法及以其為原料藥的制劑。本發(fā)明通過采用單克隆抗體技術(shù)實現(xiàn)蚓激酶活性組分的再純化，從而得到高純度蚓激酶，該方法的特點(diǎn)是所獲酶的專一性強(qiáng)，活性高，達(dá)到每毫克蛋白20萬單位以上；經(jīng)高效液相色譜測試為單一組分；在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳上呈現(xiàn)一條帶，分子量為32000±2000道爾頓；氨基酸序列分析，N-末端10個氨基酸序列為：Ile-Val-Gly-Gly-Ile-Glu-Ala-Arg-Pro-Tyr，以所述高純度蚓激酶為原料藥可以制成可供口服、肌注、以及靜脈注射與靜脈輸液多種途徑給藥的制劑，用于血栓性疾病的治療。 |
| 國際公布 |
