| 公開(公告)號 | CN1252259C |
| 公開(公告)日 | 2006.04.19 |
| 申請(專利)號 | CN200410019057.2 |
| 申請日期 | 2004.04.20 |
| 專利名稱 | 人肝癌轉移亞克隆細胞系及其建立方法 |
| 主分類號 | C12N15/08(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/08(2006.01)I;C12N13/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 南開大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 葉麗虹;張曉東;秦宵然;朱惠芳;王洪輝 |
| 地址 | 300071天津市衛(wèi)津路94號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 天津市學苑有限責任專利代理事務所 |
| 代理人 | 解松凡 |
| 國省代碼 | 天津;12 |
| 主權項 | 一種人肝癌轉移亞克隆細胞系，其特征是所述人肝癌轉移亞克隆細胞系與親本細胞系H7402形成配對關系，所述人肝癌轉移亞克隆細胞系是用下述方法建立的：(1)接種SCID鼠：將對數生長期的人肝癌細胞H7402單細胞懸液，細胞數量為1～4×107/0.2ml接種于經Cs137γ射線照射過的SCID鼠腋背部皮下；(2)確認轉移部位：將荷瘤SCID鼠處死，對各個組織的病理切片進行顯微鏡下觀察，確定其轉移部位為肺臟；(3)原代培養(yǎng)：在接種人肝癌細胞H7402后55-67天，將荷瘤SCID鼠處死，無菌解剖，取出肺臟，進行原代培養(yǎng)，方法如下：用pH7.2的D-Hanks生理緩沖液漂洗組織塊3次，去除血液、脂肪、神經組織、結締組織和壞死組織；將肺組織剪切成0.5-5mm3小塊；接種細胞培養(yǎng)瓶中，使瓶底向上，在37℃孵箱內，空氣中含體積百分比為5％的CO2條件下培養(yǎng)；2-4小時后，向培養(yǎng)瓶內加入8-10ml內含20％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，靜置培養(yǎng)，原代培養(yǎng)每3天換液一次，待從組織塊生長出大量的貼壁細胞，去除已漂浮的組織塊和殘留的血細胞；(4)傳代培養(yǎng)：將去掉組織的細胞進行細胞傳代培養(yǎng)，具體步驟如下：移去原代培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶內的細胞培養(yǎng)液，向培養(yǎng)瓶中加入2ml質量體積百分比為0.25％胰蛋白酶溶液，置37℃孵箱中2-3分鐘，觀察到細胞出現回縮、細胞間隙增大，吸除胰蛋白酶溶液，加入8-10ml內含20％胎牛血清RPMIl640培養(yǎng)液，使之形成細胞懸液，計數，接種于新的培養(yǎng)瓶，當細胞傳代到第三代時，加入的RPMI1640培養(yǎng)液內含胎牛血清為10％，細胞生長良好，形態(tài)逐漸均一，即建立了一種來源于親本人肝癌細胞H7402的肝癌轉移亞克隆細胞系。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種人肝癌轉移亞克隆細胞系及其建立方法，所述人肝癌轉移亞克隆細胞系是用下述方法建立的：將人肝癌細胞H7402單細胞懸液接種于SCID鼠；確認轉移部位為肺臟；原代培養(yǎng)；傳代培養(yǎng)，當細胞傳代到第三代以后，將培養(yǎng)液中的胎牛血清濃度降為10％，細胞生長良好，形態(tài)逐漸均一，即建立了一種來源于親本人肝癌細胞H7402的肝癌轉移亞克隆細胞系，并與親本細胞形成配對關系，為肝癌細胞轉移的研究提供新的實驗材料；可用于篩選肝癌轉移相關基因；可用于篩選肝癌轉移相關蛋白；可用于篩選抗腫瘤轉移藥物；可用于腫瘤轉移分子機理的研究；可用于進行腫瘤轉移DNA疫苗的研究。 |
| 國際公布 |
