公開(公告)號(hào)
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CN1246331C
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公開(公告)日
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2006.03.22
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200310106725.0
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申請(qǐng)日期
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2003.10.29
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專利名稱
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利用膨脹床色素親和色譜純化重組人干擾素α-2b的方法
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主分類號(hào)
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C07K14/56(2006.01)I
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分類號(hào)
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C07K14/56(2006.01)I;C07K1/16(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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天津大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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孫 彥;趙雪雁;張 磊;史清洪;董曉燕;白 姝
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地址
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300072天津市衛(wèi)津路92號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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天津市學(xué)苑有限責(zé)任專利代理事務(wù)所
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代理人
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解松凡
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國(guó)省代碼
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天津;12
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主權(quán)項(xiàng)
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一種利用膨脹床色素親和色譜純化重組人干擾素α-2b的方法,該方法是采用柱內(nèi)裝填辛巴藍(lán)修飾的石英核瓊脂糖介質(zhì)的膨脹床色素親和色譜,其過程包括介質(zhì)的修飾、吸附和脫附,其特征在于:介質(zhì)的修飾是以1-3mol/L的氯化鈉溶液配制成含辛巴藍(lán)濃度0.35-9g/L和含氫氧化鈉的濃度為3.5-36g/L的溶液,在該溶液中加入等體積的粒徑為80-500μm密度為15-3g/mL的石英核瓊脂糖介質(zhì),并在40-70℃水浴搖床中反應(yīng)10h以上,得到辛巴藍(lán)修飾的石英核瓊脂糖介質(zhì);吸附工藝是:采用pH為6.0-8.0的0.002mol/L的磷酸鈉鹽緩沖液稀釋細(xì)胞破碎液,配制成活性值為2.5×105-2.5×107IU/mL的原料液;將辛巴藍(lán)修飾石英核瓊脂糖介質(zhì)裝柱后用pH為6.0-8.0的0.001-0.02mol/L的磷酸鈉鹽緩沖液平衡,于20-30℃,以流速為80-260cm/h從膨脹床底部通入原料液,上樣量為每升柱體積1-5L原料液,并控制床層膨脹比為5-3.0進(jìn)行吸附操作;以pH為6.0-8.0的0.001-0.02mol/L的磷酸鈉鹽緩沖液,以80-260cm/h的流速在膨脹床狀態(tài)下清洗1-4個(gè)柱體積,包括去除雜蛋白和細(xì)胞碎片固形物;在固定床操作狀態(tài)用pH為9-13的0.002-0.03mol/L甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液洗脫目標(biāo)蛋白,在洗脫過程中,觀察色譜峰值,當(dāng)色譜峰響應(yīng)值達(dá)到基線位置時(shí)洗脫完畢。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種利用膨脹床色素親和色譜純化重組人干擾素α-2b的方法。該方法包括介質(zhì)的制備、吸附和脫附,其特征在于,以粒徑為80-500μm密度為1.15-1.3g/mL的石英核瓊脂糖介質(zhì),在堿性條件下修飾辛巴藍(lán)配基,合成介質(zhì);采用磷酸鈉鹽緩沖液稀釋細(xì)胞破碎液,配制成活性值為2.5×105-2.5×107IU/mL的原料液;并以流速為80-260cm/h從膨脹床底部通入原料液,控制床層膨脹比為1.5-3.0進(jìn)行吸附操作;用磷酸鈉鹽緩沖液在膨脹床狀態(tài)下清洗雜蛋白;之后在固定床操作狀態(tài)用甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液洗脫目標(biāo)蛋白。該純化方法大大縮短了分離過程的時(shí)間,提高產(chǎn)品活性收率,降低能耗。本發(fā)明在重組人干擾素α-2b的純化過程中具有廣闊的應(yīng)用前景。
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國(guó)際公布
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