| 公開(公告)號 | CN1233835C |
| 公開(公告)日 | 2005.12.28 |
| 申請(專利)號 | CN03130528.8 |
| 申請日期 | 2003.07.31 |
| 專利名稱 | 總狀共頭霉代謝物殺線蟲活性組分的分離純化方法 |
| 主分類號 | C12P7/44 |
| 分類號 | C12P7/44;A01N37/00;//C12P7/44,C12R1∶645 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 天津師范大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 孫建華;杜連祥;杜 淼;王海寬;王瑾玲;趙小軍;張 穎;路福平;李 喆 |
| 地址 | 300074天津市河西區(qū)衛(wèi)津路241號天津師范大學 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 天津市學苑有限責任專利代理事務所 |
| 代理人 | 李 明 |
| 國省代碼 | 天津;12 |
| 主權項 | 總狀共頭霉代謝物殺線蟲活性組分的分離純化方法，其特征是將總狀共頭霉代謝產物的發(fā)酵原液，采用旋轉薄膜蒸發(fā)、重結晶、弱堿性陰離子交換樹脂分離方法，經過紫外、紅外光譜及X射線單晶衍射和高效液相色譜進行分析鑒定，確定了殺蟲活性組分中含有有機酸，即為乙二酸，還有蘋果酸、酒石酸和乳酸；經濃縮重結晶技術得到含兩個結晶水的乙二酸及8配位鉀的乙二酸配合物；總狀共頭霉代謝產物殺線蟲活性物質的分離純化工藝：發(fā)酵液經真空抽濾得到發(fā)酵濾液，此后，將部分濾液即發(fā)酵原液通過離子交換柱進行層析分離，然后再通過高效液相色譜對分離組分進行檢測鑒定；另一方面將剩余濾液即發(fā)酵原液經旋轉薄膜蒸發(fā)，獲得濃縮液，再將濃縮液中析出晶體與母液分離，其中的晶體經重結晶獲得單晶，通過紫外、紅外光譜及X射線單晶衍射進行結構分析；其母液則經凝膠層析進行分離純化；分離純化的具體方法：(1)殺線蟲活性組分單晶的分離、純化和結構鑒定：發(fā)酵濾液經旋轉薄膜蒸發(fā)濃縮10-20倍后，有晶體物質析出，將析出的晶體在60-80℃下溶解后，冰箱冷藏室中或室溫下進行重結晶，得到一個單晶；室溫下進行重結晶得到另一個單晶；經熔點、紫外、紅外光譜測定以及X射線晶體衍射進行結構鑒定，證明前者為含兩個結晶水的乙二酸，其分子式為(H2C2O4)(H2O)2，后者為8配位鉀的乙二酸配合物，其分子式為K(H2C2O4)(HC2O4)(H2O)2，其結構見圖1；二者均有殺線蟲活性，兩個結晶水的乙二酸單晶最低有效劑量即MED為2mg/ml，殺蟲活性為83％，單晶8配位鉀的乙二酸配合物的最低有效劑量MED為4mg/ml，殺蟲活性為76％；(2)濾液中有機酸的分離和鑒定：離子交換柱層析：將發(fā)酵濾液用弱堿性陰離子交換樹脂進行初步分離，上樣量10-15ml，用水或添加0.15mol/L的氯化鈉溶液平衡柱，再依次用水和稀氨水進行洗脫，流速0.5ml/min-5ml/min，分部收集到不同含量的有機酸樣品，再經高效液相分析，酸性物質包括乙二酸，酒石酸，蘋果酸和乳酸。 |
| 摘要 | 總狀共頭霉代謝物殺線蟲活性組分的分離純化方法，屬于開發(fā)新型殺線蟲生物制劑，特別涉及水溶性殺線蟲生物防菌代謝物及活性組分的分離純化方法。本發(fā)明克服了水溶性總狀共頭霉代謝物分離困難的問題；提供了其殺線蟲活性組份的分離與純化方法，其具體方法是將發(fā)酵原液，采用旋轉薄膜蒸發(fā)、重結晶、弱堿性陰離子交換樹脂分離方法，經過紫外、紅外光譜及X射線單晶衍射和高效液相色譜進行分析鑒定。獲得了殺線蟲活性高、殺蟲譜廣、熱穩(wěn)定性強、水溶性的新型殺線蟲生物制劑；首次證明該菌代謝物中殺線蟲活性組份含帶兩個結晶水的乙二酸和具有新型結構的8配位鉀的乙二酸配合物，此項研究對線蟲的生物防治具有重要的理論意義和廣闊的應用前景。 |
| 國際公布 |
