| 公開(公告)號 | CN1231598C |
| 公開(公告)日 | 2005.12.14 |
| 申請(專利)號 | CN03131899.1 |
| 申請日期 | 2003.06.13 |
| 專利名稱 | 一種重組禽腺病毒的制備方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68 |
| 分類號 | C12Q1/68;C12N15/861;C12N7/01 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 揚州大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 秦愛建;何秀苗;劉岳龍;金文杰 |
| 地址 | 225009江蘇省揚州市大學(xué)南路88號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 揚州市錦江專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 江 平 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 | 一種重組禽腺病毒的制備方法，其特征在于由以下步驟完成：1)以中國雞群分離的I群禽腺病毒為材料，通過PCR方法將病毒基因組的兩個末端，即L片段和r片段，以及右ITR片段擴增出來，克隆進載體，并以報告基因EGFP插入設(shè)計好的r片段和右ITR片段之間，構(gòu)建轉(zhuǎn)移質(zhì)粒載體；2)將構(gòu)建的禽腺病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染已被野生病毒感染了的雞胚腎細胞，進行同源重組，篩選重組病毒；上述擴增基因組左末端L片段的上、下游引物分別是：PL1：5’ggggcggccgcgatgatgtataataacct3’PL2：5’gggtctagactcacgcgacatgactgtct3’上述擴增基因組右末端r片段的上、下游引物分別是：Pr1：5’gcgtctagaccagaaccattcttcagccg3’PL2：5’gcggaattcgtaccggactgttgtgcgga3’上述擴增基因組右ITR片段的上、下游引物分別是：PITR1：5’gcggaattcacacacggacaacttcaaag3’PITR2：5’gcggtcgacgatgatgtataataacctc3’。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于生物技術(shù)制藥工業(yè)中的基因工程生產(chǎn)疫苗藥物的技術(shù)領(lǐng)域。以中國分離的I群禽腺病毒為材料，通過PCR方法將該病毒基因組的兩個末端L片段和r片段、ITR片段擴增出來，克隆進pHC粘粒載體中，并以增強型綠色熒光蛋白(eGFP)基因為報告基因，插入設(shè)計好的r片段和ITR片段之間，構(gòu)建轉(zhuǎn)移質(zhì)粒載體pFAV-eGFP，然后轉(zhuǎn)染已被野生病毒感染了的雞胚腎細胞，進行同源重組，篩選重組病毒，獲得表達增強型綠色熒光蛋白的重組禽腺病毒。從而確定位于基因組右末端r片段和ITR片段之間的位點為病毒復(fù)制非必需區(qū)，并以此為載體開發(fā)研制相關(guān)基因工程產(chǎn)品。 |
| 國際公布 |
