| 公開(公告)號(hào) | CN1683523A |
| 公開(公告)日 | 2005.10.19 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510067523.9 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.04.18 |
| 專利名稱 | 一種誘導(dǎo)分化人外周血單個(gè)核細(xì)胞的方法 |
| 主分類號(hào) | C12N5/08 |
| 分類號(hào) | C12N5/08 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.9.20 CN 200410066518.1 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 上海市第一人民醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 孫寶貴;李為真;戴秋艷 |
| 地址 | 200080上海市武進(jìn)路85號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海正旦專利代理有限公司 |
| 代理人 | 包兆宜 |
| 國(guó)省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種誘導(dǎo)分化人外周血單個(gè)核細(xì)胞的方法，其特征在于采用分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞后，經(jīng)體外直接培養(yǎng)、5-氮雜胞苷誘導(dǎo)分化得到心肌細(xì)胞，包括下述步驟，1)分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞：取人股動(dòng)脈抗凝血10-15ml，用Ficoll密度梯度離心法分離出人外周血單個(gè)核細(xì)胞；2)體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞：含20％FBS的DMEM培養(yǎng)液、培養(yǎng)箱37℃2、5％CO2，將人外周血單個(gè)核細(xì)胞種植于包被有明膠的培養(yǎng)瓶中或小玻片上；3)誘導(dǎo)分化人外周血單個(gè)核細(xì)胞：DMEM培養(yǎng)液中加入5-氮雜胞苷10μmol/L；將人外周血單個(gè)核細(xì)胞種植于包被有明膠的培養(yǎng)瓶中或小玻片上；4)鑒定心肌細(xì)胞標(biāo)志：進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、相關(guān)蛋白的免疫細(xì)胞化學(xué)染色和相關(guān)基因的RT-PCR檢測(cè)。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種將人外周血單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的培養(yǎng)方法。本發(fā)明方法從人外周血分離出單個(gè)核細(xì)胞，通過體外直接培養(yǎng)，用5-氮雜胞苷誘導(dǎo)其分化為心肌細(xì)胞。本發(fā)明方法誘導(dǎo)后的外周血單個(gè)核細(xì)胞具有心肌細(xì)胞的部分特點(diǎn)，又具有干細(xì)胞的特征。本方法可最大限度利用有分化潛力的干細(xì)胞，避免成體干細(xì)胞的損失。為人外周血單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)分化的分離和培養(yǎng)建立了方法學(xué)，為此類研究奠定了基礎(chǔ)。本發(fā)明還為誘導(dǎo)后的單個(gè)核細(xì)胞回輸體內(nèi)后進(jìn)一步分化為成熟的、有功能的心肌細(xì)胞，恢復(fù)心臟功能的臨床應(yīng)用提供了準(zhǔn)備。 |
| 國(guó)際公布 |
