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表達人類CYP2J2反義基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法

公開(公告)號 CN1657632A  
公開(公告)日 2005.08.24  
申請(專利)號 CN200410061237.7  
申請日期 2004.11.30  
專利名稱 表達人類CYP2J2反義基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法  
主分類號 C12N15/861  
分類號 C12N15/861;C12N15/53;A61K48/00;A61P35/00;C12N7/01  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院  
發(fā)明(設計)人 汪道文;蔣建剛;肖嘯  
地址 430030湖北省武漢市解放大道1095號轉(zhuǎn)同濟醫(yī)院內(nèi)科汪道文  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 武漢開元專利代理有限責任公司  
代理人 王和平  
國省代碼 湖北;42  
主權(quán)項 一種表達人類CYP2J2反義基因的重組腺相關(guān)病毒,其中該重組腺相關(guān)病毒包括的三種質(zhì)粒:1)pXX2:為包裝質(zhì)粒,含有編碼腺相關(guān)病毒Rep蛋白和Cap蛋白的編碼序列。并在上游和下游各插入一個p5啟動子,使表達效率可以提高15倍,提供rAAV復制所必須的Rep蛋白;2)pXXUF1:真核表達載體,含CMV啟動子,有較強的表達效率,其含有一多克隆NotI位點,可以連接不同的目的基因,pXXUF1反向連接人CYP表化酶基因,該載體含有rAAV轉(zhuǎn)基因表達所必須的末端重復序列(ITRs),負責病毒的復制和病毒外殼的包被并攜帶目的基因;3)pXX6:為輔助質(zhì)粒,刪除了腺病毒的致病基因序列,保留了腺病毒E1A、E2A和VA1RNA基因,所表達的蛋白質(zhì)可發(fā)揮輔助作用以刺激rAAV基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯,保證rAAV產(chǎn)量;4)以上三種質(zhì)粒經(jīng)磷酸鈣沉淀法共轉(zhuǎn)染293細胞,即可在293細胞內(nèi)形成高滴度的含目的基因的rAAV顆粒。  
摘要 一種表達人類CYP2J2反義基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法,本發(fā)明所提供的該重組腺相關(guān)病毒,是從人類CYP2J2 cDNA長1509bp,編碼含503個基酸的蛋白質(zhì),利用PCR法從人類白細胞DNA中克隆人類CYP2J2 cDNA,通過三種質(zhì)粒磷酸鈣共轉(zhuǎn)染法包裝制備含反義目的基因的重組腺相關(guān)病毒并純化,制備的重組腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)染不同種類的人腫瘤細胞系,它能明顯抑制各種腫瘤細胞的增殖和遷移、促進腫瘤細胞的凋亡,抑制在體腫瘤瘤體的生長和轉(zhuǎn)移。因此,確定,CYP2J2的選擇性抑制劑和表達反義CYP2J2基因的重組腺相關(guān)病毒是腫瘤治療的潛在藥物。  
國際公布  
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