| 公開(公告)號(hào) | CN1175103C |
| 公開(公告)日 | 2004.11.10 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02135868.0 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.12.10 |
| 專利名稱 | 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑親和柱介質(zhì)的制備方法 |
| 主分類號(hào) | C12N9/00 |
| 分類號(hào) | C12N9/00 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 唐勝建 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 任維棟;孫風(fēng)祥;唐勝建 |
| 地址 | 261042 山東省濰坊市奎文區(qū)勝利東街288號(hào)濰坊醫(yī)學(xué)院整形外科研究所 |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 淄博科信專利商標(biāo)代理有限公司 |
| 代理人 | 杜�，F(xiàn) |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑親和柱介質(zhì)的制備方法，其特征是依次包括以下的步驟：A、配體的制備，將新鮮豬肺清洗后，剔除大血管、脂肪、切成碎塊，加入溫度為4℃、含0.25mol/L蔗糖的0.05-0.10mol/LTris-HCI緩沖液，該緩沖液的pH值為7.0-7.6，新鮮豬肺與緩沖液的重量體積比按克∶毫升計(jì)為3∶10-15，勻漿2-8分鐘，在溫度為4℃條件下4000-9000×g離心30-45分鐘，得上清，再在溫度為0℃條件下進(jìn)行1.6-2.6mol/L硫酸銨分級(jí)沉淀，取沉淀進(jìn)行透析、去掉硫酸銨、得酶液，將酶液上SephadexG-200凝膠柱，取酶峰部分再進(jìn)行Q HyperD離子交換層析，再凍干后獲得比活力為1200-1400u/mg的配體；B、親和介質(zhì)的制備，將載體和A步驟制得的配體按g/mmol比例為1∶0.07-0.36的配比，溶于0.2-0.8mol/L氯化鈉溶液中，調(diào)節(jié)pH3.0-9.5，加入交聯(lián)劑，交聯(lián)劑的加入量最終使交聯(lián)劑濃度達(dá)到0.02-0.36mol/L，室溫放置1-4小時(shí)，然后將樣品轉(zhuǎn)移入具塞的容器中，在溫度為35-40℃的條件下持續(xù)晃動(dòng)12-20小時(shí)，使配體固定在載體上，將固定有配體的載體先用適量蒸餾水沖洗，再用含有0.5-1.5mol/L氯化鈉的20-100mmol/L乙酸鈉沖洗，再繼續(xù)用適量蒸餾水沖洗，最終得到80-110u/g濕重的親和柱介質(zhì)，所述的載體包括交聯(lián)葡聚糖類、甲殼糖類、瓊脂糖類或纖維素類，交聯(lián)劑包括戊二醛、溴化氰、碳二亞胺及其衍生物、N-羥基磺酰琥鉑酰亞胺或β-硫酸酯乙砜基苯胺。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑親和柱介質(zhì)的制備方法，包括將新鮮豬肺勻漿，離心得上清，再進(jìn)行硫酸銨分級(jí)沉淀，取沉淀進(jìn)行透析、得酶液，上凝膠柱，取酶峰部分進(jìn)行離子交換層析，凍干后得配體；將載體和配體按配比溶于氯化鈉溶液中，調(diào)節(jié)pH，加入交聯(lián)劑，室溫放置，然后將樣品轉(zhuǎn)移入具塞容器中，持續(xù)晃動(dòng)，使配體固定在載體上，將固定有配體的載體用蒸餾水和乙酸鈉沖洗，最終得到80-110u/g濕重的親和柱介質(zhì)。用此親和柱介質(zhì)裝入親和柱，用于膠原蛋白酶解物的純化，其純化倍數(shù)為上一步的200-300倍，用于地龍、銀杏等中草藥中降低血壓有效成分的提純過程，其純化倍數(shù)為160-300倍，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它的層析。 |
| 國際公布 |
