| 公開(公告)號 | CN1504483A |
| 公開(公告)日 | 2004.06.16 |
| 申請(專利)號 | CN02134191.5 |
| 申請日期 | 2002.11.29 |
| 專利名稱 | 一種NF-κB抑制物及其制備方法、以及作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用 |
| 主分類號 | C07K14/435 |
| 分類號 | C07K14/435;C12N15/12;C12N15/861;C12P19/34;C12P21/02;A61K38/16;A61P35/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 重慶醫(yī)科大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 黃愛龍;劉冰熔;向明確;唐霓 |
| 地址 | 400010重慶市渝中區(qū)醫(yī)學(xué)院路1號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 重慶;85 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 制備一種NF-κB抑制物(IκBαM超級抑制物)，其特征在于：本發(fā)明在克隆IκBα基因的cDNA時(shí)采用特異的RT-PCR引物和兩對誘變引物；將IκBα基因的第32和36位編碼絲氨酸的密碼子分別進(jìn)行定向誘變，序列分析表明第95和106位核苷酸分別按設(shè)計(jì)由G變?yōu)門、由T變?yōu)镚，即32位和36位編碼絲氨酸的密碼子分別定向誘變?yōu)榫幋a異亮氨酸和丙氨酸的密碼子，其余序列與GeneBank中的IκBα基因序列一致，結(jié)果表明構(gòu)建成功了NF-κB的超抑制物IκBαM。 |
| 摘要 | 一種NF-κB抑制物及其制備方法、以及作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用。本發(fā)明設(shè)計(jì)兩對誘變引物和一對RT-PCR引物，運(yùn)用分子生物學(xué)相關(guān)技術(shù)，采用體外定點(diǎn)突變法分兩次將第32和36位編碼絲氨酸的密碼子分別進(jìn)行定向誘變，構(gòu)建了IκBαM超級抑制物，將超級抑制物IκBαM從pGEM-T載體亞克隆到pAdTrack-CMV穿梭載體中，然后與AdEasy-1 System系統(tǒng)的腺病毒骨架質(zhì)粒在大腸桿菌BJ5183中進(jìn)行同源重組，線性化后轉(zhuǎn)入293細(xì)胞進(jìn)行包裝、擴(kuò)增以得到完整的重組腺病毒。然后在原核及真核細(xì)胞(包括293、HepG2、HeLa、HUVEC、MAD-435S等細(xì)胞)中表達(dá)，得到的蛋白(表達(dá)的NF-κB的超級抑制物IκBαM)經(jīng)Western blot、免疫組化等方法檢測，結(jié)果表明此抑制物能穩(wěn)定、高效、持續(xù)表達(dá)；同時(shí)，在進(jìn)一步的體外實(shí)驗(yàn)研究中，聯(lián)合TNF-α作用，初步顯示了其抑制NF-κB的異�；罨⒁种颇[瘤細(xì)胞生長的效果。 |
| 國際公布 |
