| 公開(公告)號 | CN1504482A |
| 公開(公告)日 | 2004.06.16 |
| 申請(專利)號 | CN02153660.0 |
| 申請日期 | 2002.12.03 |
| 專利名稱 | 無細胞百日咳抗原蛋白的分離純化方法 |
| 主分類號 | C07K14/23 |
| 分類號 | C07K14/23;A61K39/10;A61P31/04 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 北京優(yōu)力凱生物技術(shù)有限責(zé)任公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 孫世章;李貴凡;宮慧梅;孫雪南 |
| 地址 | 100071北京市豐臺區(qū)西四環(huán)南路80號附二樓 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 北京律誠同業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 王鳳華 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種無細胞百日咳抗原蛋白的分離純化方法，包括如下步驟：(1)裝柱：選取含SiO2 70-80％，Al2O3 10-20％的食用類中速型珍珠巖，顆粒范圍在30-250μm，去除懸浮物和懸濁液后，用注射用水沖洗珍珠巖層析柱；(2)樣品處理，加樣：百日咳包特氏桿菌的培養(yǎng)液經(jīng)高速離心去除菌體收集上清液，上清液經(jīng)膜除菌過濾去除殘余菌體，除菌后濾液經(jīng)10-30KD膜包超濾濃縮至原體積的0.1-20％，濃縮液加入注射用水調(diào)整電導(dǎo)至2-4mS/cm，以線性流速小于300cm/hr通過珍珠巖層析柱；(3)洗脫：首先用50-60mM的Tris-HCl緩沖液，pH＝7.0-8.0，對珍珠巖層析柱進行洗脫，直至洗脫液的OD值為0-0.05；第二步用含有0.05-0.15M NaCl的50-60mM Tris-HCl緩沖液，pH＝7.0-8.0，對珍珠巖層析柱進行二次洗脫，直至洗脫液的OD值為0-0.05，收集第二步的洗脫液即為珍珠巖層析柱分離純化的百日咳毒素；第三步用含有0.4-0.7M NaCl的50-60mM Tris-HCl緩沖液，pH＝7.0-8.0，對珍珠巖層析柱進行第三次洗脫，直至洗脫液的OD值為0-0.05，收集第三步的洗脫液即為珍珠巖層析柱分離純化的絲狀血凝素。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉采用一種對百日咳包特氏桿菌培養(yǎng)液的上清液進行一步分離純化百日咳抗原的方法。本發(fā)明的制備工藝采用經(jīng)篩選的國產(chǎn)珍珠巖作為柱層析材料，樣品經(jīng)濃縮調(diào)整電導(dǎo)處理后，優(yōu)化洗脫條件可一步分離純化得到絲狀血凝素(FHA)和百日咳毒素(PT)；經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定，純度達85-95％。本發(fā)明的工藝方法大幅減化了純化工藝步驟，節(jié)省了時間，省去相應(yīng)的設(shè)備和價格昂貴的原料，不僅大幅度地降低生產(chǎn)成本而且顯著提高了產(chǎn)品質(zhì)量和收率，是一種簡單、快速的無細胞百日咳疫苗的分離純化方法。 |
| 國際公布 |
