| 公開(公告)號(hào) | CN1135262C |
| 公開(公告)日 | 2004.01.21 |
| 申請(專利)號(hào) | CN02117666.3 |
| 申請日期 | 2002.05.10 |
| 專利名稱 | 一種高效增殖丙肝病毒體的方法及該方法所用的載體 |
| 主分類號(hào) | C12N7/01 |
| 分類號(hào) | C12N7/01;C12N15/09;C12N15/86 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2001.5.10 CN 01114678.8 |
| 申請(專利權(quán))人 | 李衛(wèi)云;于紅潮;李一君 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 李信墻;李研 |
| 地址 | 510623 廣東省廣州市珠江新城南天廣場皇朝閣1005,1001 |
| 頒證日 | 2004.01.21 |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種能表達(dá)丙肝病毒全長基因組RNA的載體pHCV-2，其特征在于所述的載體pHCV-2是通過如下所述的方法制備得到的：(1)用引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2從丙肝病毒株1a通過PCR合成3’UTR或用引物SEQ ID NO.1和SEQ ID.NO 3從丙肝病毒株1b通過PCR合成3’UTR；(2)用引物SEQ ID NO.4和步驟(1)合成得到的3’UTR通過PCR合成復(fù)蓋NS3到3’UTR區(qū)域的HCV cDNA片段；(3)用引物SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6通過PCR從HCV cDNA合成復(fù)蓋5’UTR到N3區(qū)域的DNA片段；(4)用步驟(2)和(3)合成的DNA片段為摸板，用引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.6通過PCR合成HCV全長DNA；(5)將步驟(4)得到的HCV全長DNA克隆到pFK-1(ATCC No.623787)載體HindIII和SpeI位點(diǎn)上；(6)通過點(diǎn)突變，將NS3基因的1202位點(diǎn)的Glu變?yōu)镚ly，NS3基因的1280位點(diǎn)的Thr變?yōu)镮le，以及NS5A的2197位點(diǎn)的Ser變?yōu)楦彼�，得到能表達(dá)丙肝病毒全長基因組RNA的載體pHCV-2。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種高效增殖丙肝病毒的方法及該方法所用的載體。其中所述的載體包括能表達(dá)丙肝病毒全長基因組RNA的載體pHCV-2和能表達(dá)丙肝病毒蛋白酶和結(jié)構(gòu)酶的載體pHCV-1，所述的方法包括將所述的載體pHCV-2、pHCV-1轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，用含有vTF7-3(ATCC No.VR-2153)重組痘病毒的培養(yǎng)基培養(yǎng)所得到的轉(zhuǎn)染細(xì)胞；收集含有丙肝病毒的上清液。 |
| 國際公布 |
