一、血管內(nèi)皮細胞鑒定
在操作過程中，可能混入成纖維細胞平滑肌細胞。鑒定血管內(nèi)皮細胞基礎(chǔ)m.52667788.cn/jianyan/是根據(jù)他自身的形態(tài)、性質(zhì)。內(nèi)皮細胞有三個顯著特點：①形態(tài)學(xué)呈單層鋪路石樣排列，如前所述；②電子顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)Weibel-Palade小體；③存在第Ⅷ因子關(guān)連抗原（VWF)，用免疫法測定為陽性反應(yīng)。此外，在硬化血管取材時，巨噬細胞轉(zhuǎn)化的泡沫細胞可能混入，除形態(tài)學(xué)的差異外，泡沫細胞含有豐富的氧化修飾的LDL，氧化LDL與相應(yīng)抗體反應(yīng)后在熒光顯微鏡下極易區(qū)別。
二、平滑肌細胞的鑒定
如前所述，平滑肌細胞除形態(tài)、排列有其自身特點外，重要一點是胞漿內(nèi)有很多與細胞縱軸平行的肌絲及與其相連的致密體。在培養(yǎng)時，對正常組織而言，主要混有成纖維細胞，內(nèi)皮細胞。能夠準確識別其中一、二類細胞，其他細胞也就不難鑒別了。
三、常用的鑒定方法和條件
細胞鑒定法一般有細胞形態(tài)學(xué)觀察法、免疫化學(xué)技術(shù)觀察法、活細胞直接觀察法和培養(yǎng)細胞生物化學(xué)性狀檢測。
1．細胞一般形態(tài)學(xué)觀察法
常用方法有兩種，一是用普通顯微鏡，將細胞固定，染色后觀察；二是用電子顯微鏡將組織細胞切片、固定、包埋后觀察。
2．免疫化學(xué)技術(shù)觀察法
免疫細胞化學(xué)技術(shù)是用熒光素或酶等標記物或顯示物標記特異性抗體，通過免疫學(xué)中的抗原抗體反應(yīng)與細胞內(nèi)的相應(yīng)抗原結(jié)合www.med126.com，形成帶有熒光素或顯色物的抗原抗體復(fù)合物，用熒光顯微鏡或普通顯微鏡觀察復(fù)合物存在與否，達到鑒別細胞的目的。這一技術(shù)包括標本處理（制備、保存、固定等)，染色和結(jié)果判斷。
3．活細胞直接觀察法
細胞培養(yǎng)法可直接觀察活細胞，是組織培養(yǎng)技術(shù)的一個突出優(yōu)點。培養(yǎng)的活細胞在一般顯微鏡下，由于細胞透明，反差很少，不易看清細胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)，因此這一技術(shù)需要采用相差顯微鏡。較新的顯微攝影術(shù)（time-lapse cinemicrophotagraphy,TLCM)是直接記錄活細胞動態(tài)變化最為理想的方法，能記錄細胞連續(xù)動態(tài)變化過程，具有客觀性和示教性。
4．培養(yǎng)細胞生物學(xué)性狀檢測
觀察細胞在體外培養(yǎng)過程中，從初代培養(yǎng)開始，到繼續(xù)培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)必須每天進行常規(guī)觀察細胞是否有污染，生長狀況，培養(yǎng)液是否需要更換，這是保證實驗成功的基礎(chǔ)。所謂生物性狀檢測包括上述三種方法的運用，這里主要談以下幾個方面：①形態(tài)學(xué)觀察，培養(yǎng)的細胞可能每日每時都會發(fā)生形態(tài)改變，形態(tài)觀察又包括一般形態(tài)學(xué)觀察，超微結(jié)構(gòu)觀察如亞細胞器微絨毛的形態(tài)，微絲微管，核仁的形態(tài)和數(shù)量排列分布狀況等；②細胞增殖生長觀察，包括細胞計數(shù)，計數(shù)細胞是測定細胞絕對增長數(shù)量常用最簡便的方法；細胞分裂指數(shù)（mitotic index,MD)即細胞分裂指數(shù)=細胞分數(shù)相數(shù)/1000細胞×100。計算分裂相時要注意掌握確定分裂相標準，其中主要是確定好劃分間期和前期、末期和間期等的界限。另外，還有兩個指標即接種存活率和克隆形成率，細胞接種存活率=形成克隆數(shù)/接種細胞數(shù)×100，細胞數(shù)接種率=貼壁存活細胞數(shù)/接種細胞數(shù)×100；③其他觀察，如癌細胞具有浸潤性生長能力，這一能力是檢測癌細胞的指標。
總之，動脈粥樣硬化是多因素、多細胞相互作用的結(jié)果，細胞培養(yǎng)是研究這一疾病最有效方法之一。不同的動物血管組成、性質(zhì)不同；不同研究者有不同的實驗?zāi)康模捎玫姆椒ㄒ膊槐M相同。這里只是將血管內(nèi)皮細胞和血管中膜平滑肌細胞的培養(yǎng)和鑒定作一扼要敘述，隨著研究的深入，方法和手段也會不斷改進和發(fā)展。
（黃俊軍 周新)
