臨床上將C10以上的脂肪酸稱為游離脂肪酸（free fatty acid,FFA)或非酯化脂肪酸（nonesterifiedfatty acid,NFFA)，正常血清中含有油酸（18:1,W9)占54%，軟脂酸（16：0)占34%，硬脂酸（18：0)占6%，是其主要的NFFA。另外還有月桂酸（12：0)、肉豆蔻酸（14：0)和花生四烯酸（20：4，W6，9，12，15)等含量很少的脂肪酸。與其他脂質(zhì)比較，NFFA在血中濃度很低，其含量水平極易受脂代謝，糖代謝和內(nèi)分泌機(jī)能等因素影響，血中NFFA半壽期為1～2min，極短。血清中的NFFA是與清蛋白結(jié)合進(jìn)行運(yùn)輸，屬于一種極簡單的脂蛋白。
測定血清NFFA法有滴定法。比色法，原子分光光度法，高壓液相層析法和酶法等。一般多以酶法測定。作NFFA測定的標(biāo)本一定要注意在4℃條件下分離血清并盡快進(jìn)行測定。因?yàn)檠杏懈鞣N脂肪酶存在，極易也極快使血中TG和PL的酯型脂肪酸分解成非酯化的FFA，使血中NFFA值上升。貯存標(biāo)本僅限于24h內(nèi)，若保存三天，其值約升高30%，使結(jié)果不準(zhǔn)確。
m.52667788.cn1．非酶法測定
非酶法測定包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高壓液相層析法。前三種方法準(zhǔn)確性差；高壓液相層析法，儀器太昂貴，不便于批量操作。
2．酶測定法
主要用脂肪酶測定。血清中游離脂肪酸可分別測定酶水解后的產(chǎn)物乙酰CoA或AMP或輔酶A（CoA)進(jìn)行定量。酶法測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，快速，易于批量檢測。測定原理如圖15-6所示。
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圖15-6 血清主要FFA酶法測定圖
□：內(nèi)物質(zhì)作為生成量與變化量進(jìn)行測定；ACS：乙酰CoA合成酶；MK：肌激酶； PK：丙酮酸激酶；POD：丙酮酸氧化酶；DTNB：α-磺基苯甲酸；ACO：乙酰CoA氧化酶；ACD：乙酰CoA脫氫酶。
1．原理
血清中游離脂肪酸經(jīng)抽提到高密度銅試劑中，形成銅皂在上層溶劑中，再用二苯卡巴肼與銅顯色，進(jìn)行定量。
2．試劑組成
| 代號 | 種類 | 濃度 | 組成 | 貯存2～8℃ | 有效期 |
| R-1 | 抽提劑 | 氯仿：庚烷：甲醇=5：5：1（V/V) | |||
| R-2 | 緩沖液 | 33mmol/L | KH2PO44.539g/L 100ml+Na2HPO4·2H2O5.983g/l 50ml調(diào)pH至6.4 | ||
| R-3 | 銅貯液 | 500mmol/L | Cu（NO3)2·3H2o 12.07g加H2O→100ml | ||
| R-4 | 三乙醇胺 | 1.0mol/L | 三乙醇胺10ml，加水→100ml | ||
| R-5 | NaOH液 | 1mol/L | |||
| R-6 | 銅試劑 | R-3 10ml+R-4 10ml+R-6 6ml +H2O→100ml調(diào)pH至8.1 | |||
| R-7 | 二苯卡 巴肼液 | 二苯卡巴肼（乙醇)液（4g/L)10ml+R-4 0.1ml | 臨用前配制 | ||
| R-8 | 軟脂酸標(biāo)準(zhǔn)貯存液 | 2mmol/L | 軟脂酸51.2mg溶于100ml R-1液 | 冷藏 | |
| R-9 | R-8m.52667788.cn/wsj/的應(yīng)用液 | 500μmol/L | 用R-1液稀釋 | 冷藏 |
3．操作
按圖15-7操作。
4．計算
血清游離脂肪酸（μmol/L)=ESA/EST×500
1．原理
血清中游離脂肪酸或非酯化脂肪酸（NEFA)，經(jīng)酶試劑作用生成紫色化合物，其顏色深淺與NEFA含量成正比。
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2．試劑組成
| 代號 | 種類 | 組成 | 濃度貯存 | 貯存 |
| R1 | 緩沖液 | 磷酸緩沖液 MgCl2液 去垢劑 | 0.04mmol/LpH6.9 3mol/L | |
| R2 | 酶/輔酶 | 乙酰CoA合成酶 抗壞血酸氧化酶 CoA ATP 4-AAP 溶于10ml R1液中 | ≥0.3U/ml ≥1.5U/ml 0.9mmol/L 5.0mmol/L 1.5mmol/L | 冷藏5日 |
| R3 | 酶稀釋液 | 苯氧乙醇 去垢劑 | 0.3%(V/V) | |
| R4 | 馬來酰亞胺 該試劑與R3等體積混合 | 10.6mmol/L | ||
| R5 | 酶試劑 | 乙酰CoA氧化酶 過氧化物酶 TOOS 混合上述試劑，再等體積R4試劑混合 | ≥10U/ml 7.5U/ml 0.2mmol/L | 冷藏5日 |
| R6 | 標(biāo)準(zhǔn)液 | 1mmol/L | 冷藏 |
*應(yīng)用帶玻塞離心管
3．操作
按圖15-8操作。
4．計算
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圖15-7 血清非酯化脂肪酸測定(光度法)操作圖
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圖15-8 血清非脂化脂肪酸測定（酶法)操作圖
（胡漢寧 儲建中)
