免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn):第二節(jié)　均相酶免疫測(cè)定

一、酶擴(kuò)大免疫測(cè)定技術(shù)

酶擴(kuò)大免疫測(cè)定技術(shù)是最早取得實(shí)際應(yīng)用的均相酶免疫測(cè)定方法，是由美國(guó)Syva公司研究成功并定名的。此法主要檢測(cè)小分子抗原或半抗原，在藥物測(cè)定中取得較多應(yīng)用。酶擴(kuò)大免疫測(cè)定技術(shù)（enzyme-multipliedimmunoassaytechnique，EMIT)試劑盒的商標(biāo)取名為EMIT。

EMIT的基本原理是半抗原與酶結(jié)合成酶標(biāo)半抗原，保留半抗原和酶的活性（圖15-2B)。當(dāng)酶標(biāo)半抗原與抗體結(jié)合后，所標(biāo)的酶與抗體密切接觸，使酶的活性中心受影響而活性被抑制（圖15-2A)。EMIT試劑盒中的主要試劑為：①抗體，②酶標(biāo)半抗原，③酶的底物。檢測(cè)對(duì)象為標(biāo)本中的半抗原。當(dāng)試劑①、②與標(biāo)本混合后，標(biāo)本中的半抗原與酶標(biāo)的半抗原競(jìng)爭(zhēng)性地與試劑中的抗體相結(jié)合。如標(biāo)本中的半抗原量少，與抗體結(jié)合的酶標(biāo)半抗原的比例增高，游離的具有酶活力的酶標(biāo)半抗原的量就減少。因此在反應(yīng)后酶活力大小一標(biāo)m.52667788.cn/zhicheng/本中的半抗原呈一定的比例，從酶活力的測(cè)定結(jié)果就可推算出標(biāo)本中半抗原的量。

圖15-2EMIT原理示意圖

二、克隆酶供體免疫測(cè)定

利用重組DNA技術(shù)制備β-半糖苷酶的兩個(gè)片段：大片段稱為酶受體（enzymeacceptor，EA)，小片段稱為酶供體（enzymedonor，ED)。兩個(gè)片段本身均不具酶活性，但在合適的條件下結(jié)合在一起就具有酶活性。利用這兩相片段的特性建立的均相酶免疫測(cè)定稱為克隆酶供體免疫測(cè)定（clonedenzymedonorimmunoassay,CEDIA)。CEDIA的反應(yīng)模式為競(jìng)爭(zhēng)法，測(cè)定原理為：標(biāo)本中的抗原和ED標(biāo)記的抗原與特異性抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，形成兩種抗原抗體復(fù)合物。ED標(biāo)記的抗原與抗體結(jié)合后由于空間位阻，不再能與EA結(jié)合。反應(yīng)平衡后，剩余的ED標(biāo)記抗原與EA結(jié)合，形成具有活性的酶（圖15-3)。加入底物測(cè)定酶活力，m.52667788.cn/wsj/酶活力的大小與標(biāo)本中抗原含量成正比。CEDIA主要用于藥物和小分子物質(zhì)的測(cè)定。

圖15-3CEDIA原理示意圖