76說明雙縮脲法成為測定血清總蛋白參考方法的理由？并解釋其標化法計算公式中的0.298是什么含義？
�。�1)我國衛(wèi)生部醫(yī)政司推薦的雙縮脲法試劑配方是Doumas1981年推薦的優(yōu)化配方，此配方的精密度和準確度優(yōu)于其它生化專著中介紹的不同配方；本方法簡便、準確、重復性好，試劑與蛋白質肽鍵反應專一，不受蛋白質分子量和氨基酸組成的影響，干擾因素較少，故成為公認的測定血清總蛋白的參考方法。
（2)Doumas等確定0.298為純蛋白—雙縮脲復合物的吸光系數(shù)。即按照Doumas的標準試劑配方，在波長540nm，比色杯光徑1.0cm，分光光度計波長帶寬≤2nm等標化條件下，雙縮脲反應液中蛋白質濃度為1.0g/L時的吸光度。
77血清白蛋白溴甲酚綠（BCG)法為什么在反應5S時讀取A值，而溴甲酚紫（BCP)法為什么定在60S以后？
因為血清白蛋白與BCG呈現(xiàn)即刻反應后反應液顏色即不再加深，但是所測定的血清樣品中，除白蛋白外尚有相當數(shù)量的a1-抗胰蛋白酶、a1-酸性糖蛋白、轉鐵蛋白、觸珠蛋白、c反應蛋白和銅藍蛋白等所謂“慢反應蛋白質”，它們與BCG的反應要在15min甚至1h才能完成。為了防止這種非特異性反應的干擾，故將BCG法的讀取A值時間定在5s（或10s)，這樣所測得的結果與免疫火箭電泳法高度一致。
BCP試劑只與白蛋白反應，不與白蛋白以外的其它蛋白質顯色。故此法測定A值的時間可放在呈色后1h以內，不影響測定值的準確性。
78何謂真血糖？判斷一項血糖測定方法的測定結果是否接近血糖真值，主要依靠方法的什么性能？試舉例加以說明。
所謂真血糖是指血液中的葡萄糖。
測定方法的特性越高其血糖測定結果越接近真值。例如同位素稀釋—質譜法所測得的血糖值沒有偏差，是公認的決定性血糖測定方法；已糖激酶（HK)法試劑兩個工具酶對底物高度專一，故其測定結果準確性很高，是公認的血糖測定的參考性方法；而葡萄糖氧化酶（GOD)法中GOD對葡萄糖的專一性是很高的，但其第二步反應的過氧化物酶（POD)特異性差，維生素C、膽紅素、尿酸等多種物質能使H2O2還原，使測定結果偏低。所以GOD法只能用于常規(guī)分析。
79何謂Trinder反應？試說明此反應的分析特性。
Trinder反應是指對氧化酶催化底物氧化過程中產生的H2O2在過氧化物酶作用下，與4—氨基安替匹林及苯酚生成紅色色素的反應。此反應首先由Trinder于1969年提出，故名。Trinder反應最初使用苯酚作生色劑，后來有許多作者提出十余種化合物替代苯酚（如2.4—二氯酚等)，使反應的靈敏度得以顯著提高。Trinder反應構成了葡萄糖、膽固醇、甘油三脂及尿酸等酶法測定的基礎，有較為重要的使用價值。但是由于催化Trinder反應的過氧化物酶對底物專一性差，維生素C、尿酸、谷胱甘肽及膽紅素等還原性物質也與色原性物質競爭H2O2，從而使氧化過程中產生的H2O2被消耗，導致色素形成減少，測定結果偏低。此外，工具酶中如夾雜有較多的過氧化氫酶，也能消耗氧化產物H2O2，使被測物的測定值偏低。
80評述K、Na、Li元素原子火焰發(fā)射光譜的發(fā)生原理。
火焰光度分析法是一種發(fā)射光譜分析方法。樣品中的K、Na、Li原子受火焰的熱能作用而被激發(fā)處于高能級的激發(fā)態(tài)。處于激發(fā)態(tài)的原子不穩(wěn)定，要躍遷回到低能級的基態(tài)。當此電子躍遷回到基態(tài)時就放出能量，發(fā)射出元素特有波長的輻射譜線，利用此原理可進行火焰光度分析。Na原子的3s基態(tài)電子經火焰激發(fā)可躍遷到3p、3d或4p亞層中。當此電子由3p返回到3s亞層時。則產生589nm波長的輻射（黃色火焰)。K原子受火焰激發(fā)時，4s電子可躍遷到4p、4d或5p亞層，若由4p返回4s基態(tài)時，可輻射出767nm波長的深紅色光譜。Li原子的2s電子受火焰激發(fā)可躍遷到2p、3p或3d亞層，若由2p返回2s基態(tài)時，發(fā)射出光譜波長為671nm（紅色火焰)。
81說明Fe、Zn、Cu、Mg的原子吸收光譜特征？
原子吸收分光光度法是基于從光源輻射出具有待測元素特征譜線的單色光，通過試樣蒸氣時被蒸氣中待測元素基態(tài)原子所吸收，由輻射譜線被減弱的程度來測定試樣中待測元素含量的方法。該方法的技術關鍵是采用由被測元素作陰極的空心陰極燈作光源，光源燈發(fā)出含有被測元素共振線的線光譜通過原子化器時，其中的共振線被待測元素所吸收，吸收的多少與待測元素的含量有關。
Fe、Zn、Cu、Mg等元素強烈的特征性吸收譜線是：
Fe：248.3nm
Zn：213.8nm（空氣—乙炔火焰)
Cu：324.5nm
Mg：285.2nm（空氣—乙炔火焰)
82何謂血漿功能酶？舉例加以說明。
血漿功能酶是指在血漿中有確定的和特異生理生化功能的一類酶，它們不僅在血漿中發(fā)揮催化作用，而且酶在血漿中的濃度也明顯高于其它組織。血漿功能酶包括：
（1)大多數(shù)凝血因子和纖溶酶原：如凝血酶原（第Ⅱ因子)、前激肽釋放酶、纖維蛋白溶酶原等。
（2)參與血漿脂蛋白代謝的兩種酶：脂蛋白脂肪酶（LPL)和卵磷脂膽固醇�；D移酶（LCAT)。
�。�3)銅藍蛋白（亦稱亞鐵氧化酶)。
�。�4)腎素（即血管緊張肽原酶)：腎素是由腎小球旁器的顆粒細胞合成并釋放進入血液的一種蛋白水解酶，催化血管緊張素原轉變成血管緊張素Ⅰ。
�。�5)血漿膽堿脂酶，等。
83何謂酶的催化活性濃度？酶的活性單位如何表示？
�。�1)酶的催化活性濃度是酶含量測定的一種表示方法。它是利用酶的催化特性，通過測定被加速的反應速度來間接的算出酶含量的高低，此法的結果不能用質量單位，只能用反應速度單位（μmol·min-1)來表示酶量的多少，并計算出一定體積（L)標本中酶的含量（活性單位數(shù))。這種表示酶濃度的確切名稱是酶的催化活性濃度，簡稱為酶活性濃度。
�。�2)酶活性單位有：①國際單位（在特定條件下每min催化1μmol底物轉化的酶量)；②催量（katal，簡稱Kat)：它的定義是在最適條件下每s催化1mol底物轉化的酶量。Kat對血清酶活性測定而言顯得過大，故用μkatal或nkatal.兩者可換算
1IU=1μmol·min-1=16.67nmol·s-1=16.67nkatal
84解釋連續(xù)監(jiān)測法。說明本法為什么要在線性反應期進行測定？
�。�1)連續(xù)監(jiān)測法是指在適當?shù)膬x器上，在不終止酶反應的條件下，多點監(jiān)測整個酶促反應過程中某一反應引起的產物或底物隨時間變化的情況，在反應速度恒定期間，以單位時間酶反應初速度計算酶的活性濃度。由于本方法測定的是反應速率，故又名“速率法”；又由于測定是在酶促反應動態(tài)期進行的，故又稱“動力學法”（也曾稱為“動態(tài)法”)。但IFCC文件建議避免將本法稱為“動態(tài)法”，而應稱為“連續(xù)監(jiān)測法”。我國衛(wèi)生部臨床檢驗中心亦推薦使用“連續(xù)監(jiān)測法”。醫(yī)學全.在線.網.站.提供
�。�2)酶促反應的線性反應期是指在最佳條件下，酶促反應速度保持恒定（零級反應期)的時間內進行的反應。此時反應產物的生成量與反應時間呈正比例，單位時間內吸光度的變化值亦與酶活性成正比例。這樣就能保證測定結果較為準確可靠。
85解釋非結合膽紅素（Bu)、結合膽紅素（Bc)和δ膽紅素（Bδ)？
�。�1)非結合膽紅素（Bu)是指游離膽紅素，是血紅素的代謝產物，分子式為C33H36N4O，分子量584.7，金黃色，不溶于水，易溶于有機溶劑，不與重氮試劑直接顯色，是正常血清中的主要膽色素。
�。�2)結合膽紅素（Bc)：在一分子非結合型膽紅素的兩個丙酸基側鏈上結合二個葡萄糖醛酸殘基即構成膽紅素葡萄糖醛酸二酯，稱為結合膽紅素（Bc)。它是在肝細胞內合成的，是膽汁中的主要膽紅素。水溶性，能與重氮試劑直接顯色，無毒性。
�。�3)δ—膽紅素（Bδ)：在長期高膽紅素血癥病人血漿中存在δ—膽紅素。Bδ有兩種形式：一種是脂型的Bδ，是一個丙酸基側鏈以共價鍵與Alb結合，另一個丙酸基側鏈結合著糖醛酸；未酯化型Bδ只有一個丙酸基與Alb結合。85%的Bδ能與重氮試劑直接顯色。Bδ既不被肝細胞攝取。也不能被腎小球濾過，致使它在循環(huán)血液中有較長的停留時間。
86何謂腎清除率和內生肌酐清除率？說明其判斷指標。
�。�1)腎清除率是指單位時間內（min)經腎小球濾出的血漿濾液量（ml/min)。
�。�2)內生肌酐清除率（ccr)是指單位時間（min)內，腎臟清除血漿內生肌酐的血漿體積，其結果以ml/min表示。
�。�3)內生肌酐清除率試驗是判斷腎小球濾過功能的敏感指標，其判斷指標主要有：
①參考值：男105±20ml/min
女95±20ml/min
�、诔醪焦烙嬆I小球濾過功能損害的程度：
若Ccr70——51ml/min輕度損害
50——31ml/min中度損害
<30ml/min重度損害
慢性腎功能衰竭的病人：
若Ccr20——11ml/min為早期腎功能衰竭
10——6ml/min為晚期腎功能衰竭
<5ml/min為終末期腎功能衰竭
�、壑笇е委煟篊cr<30ml/min限制蛋白質攝入
<30ml/min噻嗪類利尿藥治療無效
く10ml/min應結合臨床進行透析治療
87解釋Jaffe反應及“假肌酐”兩個名詞，并說明如何消除“假肌酐”對Jaffe反應的干擾？
（1)Jaffe反應是指血漿中的肌酐與堿性苦味酸鹽反應，生成黃紅色的苦味酸肌酐復合物的反應。
�。�2)Jaffe反應特異性不高，標本中的維生素C、丙酮酸、丙酮、乙酰乙酸、甲基多巴、高濃度的葡萄糖、蛋白質和一些抗菌素如青霉素G、頭孢噻吩、頭孢西丁、頭孢唑啉等也都能與堿性苦味酸生成紅色復合物。這些不是肌酐但能起顯色反應的物質稱為“假肌酐”。
�。�3)消除“假肌酐”干擾，主要采取兩種辦法：
�、儆梦絼ü杷徜X或純化漂白土)吸附或用離子交換樹脂除去“假肌酐”。
②在速率法測定中，設置20S延遲期，即在樣品與堿性苦味酸試劑混勻后的20—80S之間（此時期中肌肝與苦味酸反應占主導地位，稱為“窗口期”進行測定，可得到較準確的測定結果。
88試述ApoAI、ApoB100和ApoCⅡ的合成部位及其主要功能？
�。�1)ApoAI由肝細胞合成，是HDL的主要結構蛋白，其功能是激活LCAT（卵磷脂膽固醇�；D移酶)，在膽固醇的逆向運轉中起重要作用。
（2)ApoB100由肝臟合成，是LDL.VLDL的結構蛋白（肝臟合成的每一個VLDL顆粒中只含1分子apoB100，LDL由VLDL轉變，每個LDL顆粒中只含1分子apoB100)，也是LDL受體的配體。
�。�3)ApoCⅡ主要來源于肝臟。其主要功能是激活脂蛋白脂酶（LPL)，啟動LPL對乳糜微粒和VLDL中甘油三脂的水解反應。
89何謂基質效應？試述它對血脂測定結果準確性的影響。
�。�1)“基質”是指標本中除分析物以外的一切組份。對血清膽固醇測定而言，就是指膽固醇以外血清中的一切成份及其物理化學性質。
�。�2)“基質效應”是指：①標本中除分析物以外的其它成分對分析物測定值的影響；②基質對分析方法準確測定分析物能力的干擾。廣義說來，基質效應也應包括已知的干擾物（如膽固醇測定中的膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸等都是干擾物)，但目前只將基質效應限于生物材料中未知或未定性的物質或因素（如粘度、pH等)的影響。基質效應所致分析結果的偏差稱為基質偏差（matrixbias)。
�。�3)基質效應對血脂測定結果準確性的影響：以總膽固醇測定為例，1979年由Cooper證實，在膽固醇酶法測定中，由于校準液與病人血清的反應性不同，可使總膽固醇的測定值偏低5%～7%.80年代也有不少報告指出校準液中的膽固醇用酶法測定回收率偏低。在甘油三脂、HDL-C及LDL-C酶法測定中也出現(xiàn)了不同程度的基質效應。因此采用定值人血清做校準物來克服基質效應對血脂分析結果準確性的影響是十分重要的。
90說明2.3-DPG對Hb與O2結合的影響？
2.3-DPG是2.3-二磷酸甘油酸的縮寫，它是紅細胞糖酵解支路的產物。在成熟紅細胞內，2.3-DPG的含量在動脈血中為3400μmol/L，靜脈血中為4940μmol/L，比糖酵解中間產物（如3—磷酸甘油酸等)高出數(shù)百倍。研究確定2.3-DPG在紅細胞內有重要生理功能，即能降低Hb和O2的親和力，促使HbO2釋放O2以適應組織對氧的需求。
2.3-DPG在近中性pH環(huán)境中與Hb（脫氧血紅蛋白)以等分子（1：1)結合，結合常數(shù)為105mol-1；但是它與HbO2（氧合血紅蛋白)的結合常數(shù)相比只有前者的1/100，可見2.3-DPG主要與脫氧Hb結合。當它與HbO2的二條β鏈形成鹽鍵結合后，使Hb變成T型（緊密型)，降低了Hb與O2的親和力，從而促進HbO2解離釋放O2.這種作用在PO2較高的肺部影響較小，但血液流經組織時，紅細胞內存在的2.3-DPG就發(fā)揮作用，使HbO2大量分解釋放出O2、供組織利用。
91何謂Bohr效應？說明其發(fā)生的機理及生理意義。
�。�1)Bohr效應：血液pH對Hb與O2親和力的影響稱為Bohr效應。
�。�2)Bohr效應的發(fā)生機制與pH改變引起Hb構象改變有關。即當H+濃度增加或PCO2增加時，可促進Hb的a鏈氨基端纈氨酸的氨基和a鏈122、β鏈146組氨酸殘基的異咪唑基與H+結合，使其帶正電荷，從而促進鹽鍵的形成，使Hb變成T型（緊密型)結構，導致Hb對O2的親和力降低。反之，鹽鍵斷裂，Hb變成R型（松弛型)，增大了Hb對O2的親和力。醫(yī)學 全在.線提供
（3)Bohr效應具有重要生理意義：當血液流經肺部時，CO2從血液向肺泡擴散，血液PCO2下降，[H+]也降低，均使Hb對O2的親和力增加，氧離曲線左移，在任一PO2下Hb氧飽和度增加，血液運氧量加大；當血液流經組織時，CO2從組織進入血液，血液PCO2和[H+]升高，Hb對O2親和力降低，曲線右移，促進HbO2解離向組織釋放更多的O2.
92什么是Porter—Silber反應和Zimmermann反應？說明它們的用途？
�。�1)Porter和Silber的比色法是測定尿17羥類固醇（17-OHCS)的常用方法。用提取劑提取酸性尿（pH2.4～2.6)中的17-OHCS，在提取相中加入Porter-Silber試劑，在60℃水浴中保溫30min.完成Porter-Silber氏顏色反應。此反應的實質是17-OHCS與鹽酸苯肼的硫酸溶液作用，生成一種能產生黃色腙的21-醛)，通過與同樣處理標準比色，計算出尿液中17-OHCS的含量。
�。�2)Zimmermann反應是測定尿中17-酮類固醇（17-KS)的方法學基礎。尿中17-KS結合物在酸性（pH2.0)環(huán)境中，經加熱水解，用乙醚提取水解后游離的17-KS，洗滌后使17-KS與堿性間二硝基苯反應，生成特征性紫色反應，即Zimmermann反應。
93什么是OCV和RCV？說明實驗室進行OCV和RCV的工作條件？
�。�1)OCV是“最佳條件下的變異”的英文縮寫。它表示本室在目前條件下該檢驗項目所能達到的最好的精密度水平。各種不同方法中OCV的測定必須遵循一條基本原則，即OCV的測定應使用與常規(guī)工作相同的檢驗方法、試劑和儀器。但對儀器必須重新進行校正；試劑應新鮮配制并進行標定；由技術熟練的工作人員操作；在全部測定過程中應嚴格控制溫度、光照、反應時間等一切可能影響檢驗結果的因素，并正確的計算檢驗結果。
（2)RCV是“常規(guī)條件下的變異”的英文縮寫。它表示本室目前條件下，常規(guī)工作中該檢驗項目的精密度水平。做RCV的基本要求是把質控樣品完全當病人標本，每天由作常規(guī)檢驗的操作者隨同病人樣品同批測定，而不要有任何特殊照顧，以便能真實反映常規(guī)檢驗的精密度。
94什么是任選式全自動生化分析儀？在生化自動分析工作中采取哪些抗交叉污染的措施？
�。�1)任選式全自動生化分析儀具有在一個通道中任意選擇測定多種項目（一般可高達60項以上)。所謂任選有兩種方式。其一是輸入樣品的順序，測定完一個樣品的所有項目后再做下一個樣品。另一種方式是按做批量測定的方式，將輸入的所有樣品按欲測項目進行組合分類。相同的項目一起測定，測完一種項目再測另外一種項目。
�。�2)全自動生化分析儀在工作中防止交叉污染的主要措施有：
�、偌訕犹结�、試劑探針的自動清洗與沖洗功能；
②比色皿的自動沖洗功能；
�、圩詣庸鈷呙璞壬螅蕹缓细竦谋壬�；
④計算機自動降低具有相似測定方法的測定項目間的交叉污染概率。
95解釋真值、誤差、精密度和準確度？
�。�1)真值：標本中被測物的真實濃度稱為真值。
�。�2)誤差：誤差是實驗誤差的簡稱，是某量值的給出值與其客觀真值之差。
�。�3)精密度：精密度是表征測定結果中隨機誤差大小程度的指標，即同一標本在一定條件下多次重復測定所得到的一系列單次測定值的符合程度叫做精密度。
�。�4)準確度：準確度是指測定結果與真值接近的程度。準確度主要受測定系統(tǒng)中系統(tǒng)誤差的支配（系統(tǒng)誤差越小準確度越高)，也受隨機誤差的影響。所以準確度是表示測定結果中系統(tǒng)誤差和隨機誤差的綜合。
96如何區(qū)分一個分析方法的特異性差和受干擾物質的干擾？舉例加以說明。
�。�1)某些非分析物與試劑發(fā)生反應，影響了測定結果的準確性，說明該方法特異性差。例如在用溴甲酚綠法測定血清白蛋白（Alb)時，BCG除了與Alb發(fā)生“快反應”外，還與血清中的a1酸性糖蛋白、轉鐵蛋白、觸珠蛋白、C反應蛋白和銅藍蛋白等進行所謂的“慢反應”，使該法Alb測定值偏高，表明BCG方法用于血清白蛋白測定時其特異性差。
（2)所謂干擾是指某些非分析物改變了被測定物和試劑間的反應，從旁影響了分析物被該方法檢測的正確度。例如在GOD—PAP法測定葡萄糖的試驗中，維生素C、尿酸等還原性物質也能使H2O2還原，導致血糖測定結果偏低。
97解釋PCR、DNA—PCR、RT—PCR、原位PCR和定量PCR？
�。�1)PCR是聚合酶鏈反應（Polymerasechainreaction)的英文縮寫，是近年來發(fā)展起來的一種在體外特異擴增某一目的DNA片段的技術。
�。�2)DNA—PCR：以DNA為模板，擴增特定核苷酸序列。主要用于檢測特定基因或DNA片段的存在，并常與核酸分子雜交結合，分析檢定基因突變。
�。�3)RT—PCR：用提取的mRNA或總RNA（含有mRNA)為模板，通過逆轉錄擴增cDNA.是檢測特定基因表達水平的主要方法之一，也是用于鑒別、診斷RNA病毒的重要技術。
�。�4)原位PCR：與原位雜交一樣，原位PCR也無需提取DNA/RNA，直接用組織切片和細胞進行PCR或RT—PCR.它既能鑒定含有靶DNA/RNA序列的細胞，又能確定靶DNA/RNA序列在細胞內或染色體上的位置。
�。�5)定量PCR：PCR產物經凝膠電泳分離轉移膜上，與放射性核素或化學發(fā)光標記的核酸探針雜交。根據(jù)放射自顯影或化學發(fā)光后底板爆光的強弱，用密度計掃描定量。此法在基因診斷中應用甚廣。
98簡述膽固醇在體內的轉化途徑。
（1)轉變?yōu)槟懰岷兔撗跄懰幔?/P>
�。�2)合成膽固醇脂；
�。�3)在腸道內轉變?yōu)榧S固醇隨糞便排出體外；
�。�4)合成皮質類固醇和性激素；
�。�5)轉變?yōu)榫S生素D.
99試列舉五種主要在肝臟進行的代謝。
�。�1)可利用糖原提供血糖；
（2)進行糖異生；
�。�3)在脂類代謝過程中生成酮體；
�。�4)尿素的生成；
�。�5)進行生物轉化作用。
100試述α1-微球蛋白（α1-m)、β2-微球蛋白（β2-m)的生化特點及其測定對早期腎損傷的診斷價值？
�。�1)α1-m：α1-m是一種糖蛋白（含糖量為20%)，分子量較�。�3KD)，pI4.5~5.0.α1-m由肝臟產生。血液中的α1-m有游離型和與IgA結合型兩種存在形式，其游離型可通過腎小球濾過，絕大部分在腎小管重吸收降解，故在各類腎病引起的腎小球濾過功能降低時，血清α1-m濃度升高。此時血清α1-m濃度與血清肌酐、血尿和β2-m等呈正相關（r=0.7以上)。
�。�2)β2-m：β2-m存在于除紅細胞和胎盤滋養(yǎng)層細胞以外所有有核細胞，尤其在單核細胞和淋巴細胞中含量豐富，在免疫應答中起重要作用。β2-m分子量約為11.8KD，由100個氨基酸組成的單鏈多肽，pI5.70.它可被腎小球濾過，腎小球的濾過系數(shù)達0.90，又可被近端腎小管全部重吸收降解。血中β2-m的半衰期為1.8h.血中β2-m濃度主要受腎小球濾過功能的影響。故血清β2-m能早期判斷腎小球濾過功能，較測定血清肌酐更靈敏。腎移植成功后血清
β2-m很快下降，當發(fā)生排斥反應時，由于腎濾過率下降，并且因排斥引起淋巴細胞增多（β2-m合成增多)，血清β2-m常增高。
