1.AB0血型鑒定原理
常用鹽水凝集法檢測紅細胞上存在的血型抗原,以及血清中存在的血型抗體,依據(jù)抗原抗體存在的情況判定血型。常規(guī)的方法有:①正向定型:用已知抗體的標準血清檢查紅細胞上未知的抗原。②反向定型:用已知血型的標準紅細胞檢查血清中未知的抗體。結(jié)果判定:凡紅細胞出現(xiàn)凝集者為陽性,呈散在游離狀態(tài)為陰性。醫(yī)學.全在.,線提,供m.52667788.cn
2.鑒定方法
。1)生理鹽水凝集法:①玻片法:操作簡單,適于大量標本檢查,但反應(yīng)時間長;被檢查者如血清抗體效價低,則不易引起紅細胞凝集,因此,不適于反向定型。②試管法:由于離心作用可加速凝集反應(yīng),故反應(yīng)時間短,而且,借助于離心力可以使紅細胞接觸緊密,促進凝集作用,適于急診檢查。
紅細胞亞型抗原性弱,如抗A抗B標準血清效價低時,易造成漏檢或誤定。如加用O型(抗A、B)血清和反向定型,可避免此類錯誤。
玻片法凝集結(jié)果判斷:紅細胞呈均勻分布,無凝集顆粒,鏡下紅細胞分散。在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標準:①呈一片或幾片凝塊,僅有少數(shù)單個游離紅細胞為(++++)。②呈數(shù)個大顆粒狀凝塊,有少數(shù)單個游離紅細胞為(+++)。③數(shù)個小凝集顆粒和一部分微細凝集顆粒,游離紅細胞約占1/2為(++)。④肉眼可見無數(shù)細沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察,每凝集團中有5~8個以上紅細胞凝集為(+)。⑤可見數(shù)個紅細胞凝集在一起,周圍有很多的游離紅細胞(±)。⑥可見極少數(shù)紅細胞凝集,而大多數(shù)紅細胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細胞凝集,紅細胞均勻分布為(-)。
(2)凝膠微柱法:是紅細胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體,加入試劑、標本,用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標準化,定量加樣,確保結(jié)果準確性醫(yī),,學全在.線提.供m.52667788.cn。
3.抗A、抗B和抗AB標準血清標準
準血清均采自健康人,并應(yīng)符合下述條件:①特異性:只能與相應(yīng)的紅細胞抗原發(fā)生凝集,無非特異性凝集。②效價:我國標準抗A和抗B血清效價均在1:128以上。③親和力:我國標準要求抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時間分別是15s、30s和45s;抗B對B型紅細胞開始出現(xiàn)凝集的時間為15s。凝集強度為3min時,凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價:在1:4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。
4.血型鑒定操作時注意事項
一般注意事項:①所用器材必須干燥清潔、防止溶血,凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染,建議使用一次性器材。標準血清從冰箱取出后,應(yīng)待其平衡至室溫后再用,用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。②加試劑順序:一般先加血清,然后再加紅細胞懸液,以便核實是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細胞的反應(yīng)溫度以4℃最強,收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾,一般在室溫20℃~24℃內(nèi)進行試驗,而37℃條件,可使反應(yīng)減弱。④幼兒紅細胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱,最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應(yīng)時間不能少于10min,否則較弱凝集不能出現(xiàn),造成假陰性。⑥正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報告。⑦反定型法:先天性免疫球蛋白缺陷,長期大量應(yīng)用免疫抑制,血型抗體可減弱或消失;血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難;新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體,且自身血型抗體效價又低,因而出生6個月以內(nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及(或)抗B抗體,可引起假陰性或血型鑒定錯誤。
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