自1983年Warrn和Marshall從胃粘膜成功分離出幽門螺桿菌（Helicobacter Pylori，Hp)后，與胃炎及潰瘍病的關(guān)系引人關(guān)注，并指出Hp可能是其病因之一。檢測Hp感染方法較多。本文對95例胃粘膜組織行細菌培養(yǎng)、尿素酶試驗、直接涂片、HE染色、Giemsa染色、改良Warthin－Starry銀染檢測Hp的方法比較。力求尋找出簡便、經(jīng)濟、敏感性、特異性高的方法，實用于臨床診斷Hp感染。
1 對象和方法
1.1 對象
連續(xù)收集1990—03～1990—06因上消化道癥狀行內(nèi)鏡檢查（Olympus GIF XQ10)。胃鏡診斷慢性胃炎及消化潰瘍患者95例。取距幽門5cm內(nèi)的胃竇粘膜5塊，分別供以上各種檢測用。男74例，女21例；17歲～62歲，平均年齡42.8歲；其中慢性胃炎30例、胃潰瘍8例，球部潰瘍37例，復合潰瘍20例。
1.2 方法
�、偌毦囵B(yǎng)：將活檢標本接種于肉浸液加8％～10％羊血及抗菌混合液的瓊脂平板中，于防良厭氧缺罐（5％O2，7％CO2、80％N2、8％H2、濕度98％)內(nèi)，37℃、培養(yǎng)3d～7d，見1mm～2mm大小的露滴樣、光滑、灰白色菌落，菌落涂片鏡檢生化鑒定（尿素酶、氧化酶、觸酶等)。7d不見菌落為陰性。②尿素酶試驗：采用改良Christensen細菌尿素酶鑒定試劑。取0.1ml試劑于平皿圓孔中，將胃粘膜置于此孔中，試劑由淡黃變淡紅色為陽性，不變色為陰性，其中1h內(nèi)變色為陽性，2h～5h變色為延遲性。③直接涂片：粘膜涂于潔凈玻片上，范圍為1.5cm×2.5cm大小，酒精燈固定，革蘭染色，10×100倍油鏡觀察。Hp為革蘭陰性呈∽、C彎曲狀或螺旋狀，形態(tài)典型。④HE染色：常規(guī)HE染色，鏡檢。40×10倍光鏡下生病理診斷，100×10銳油鏡下觀察Hp。Hp位于胃粘膜上皮表面，胃小凹及胃腺腔中，呈淡紅變彎曲狀物，較難分辨。⑤改良W－S銀染：將脫蠟切片于43℃的1％AgNO3液中浸潤15min，準備顯色劑。將浸染的切片于盛有顯色劑立式染缸中加蓋、加熱維持恒溫70℃約8min～10min，切片呈淺棕色。取出切片，熱水徹底沖洗，脫水，透明，中性樹脂封片。100×10倍鏡下觀察Hp，其在淡黃色背景上呈棕色或褐色彎曲狀物，易辨認。⑥Giemsa染色：將脫蠟切片于Giemsa稀釋液中浸染20min，待組織呈藍色，蒸餾水漂洗，PBS液分色約3min～5min，透明，中性脂封片。100×10倍鏡下觀察。Hp呈深藍色彎曲狀物，較易分辨。⑦菌量分級：菌Marshall分級法0級；無菌；Ⅰ級：認真尋找可見；Ⅱ級：多數(shù)高倍視野可見；Ⅲ級：高倍視野很多或成堆成串。
所有資料按四格表行X2檢驗，若例數(shù)小于40或理論值小于1，則采用確切概率法計算。
2 結(jié)果
表1 檢測Hp各種方法的檢出率
|
檢測方法 |
n |
陽性 |
陰性 |
假陽性 |
假陰性 |
敏感性(％) |
特異性(％) |
檢出率(％) |
|
細菌培養(yǎng) |
95 |
60 |
35 |
0 |
8 |
88.2 |
100.0 |
63.2 |
|
尿素酶試驗 |
95 |
66 |
29 |
1 |
3 |
95.6 |
96.4 |
69.5 |
|
直接涂片 |
95 |
58 |
37 |
1 |
10 |
85.0 |
96.4 |
61.1a |
|
HE染色 |
95 |
56 |
39 |
0 |
12 |
69.0 |
100.0 |
58.9a |
|
Giemsa染色 |
95 |
68 |
27 |
2 |
2 |
97.1 |
92.5 |
71.5 |
|
改良W－S |
95 |
71 |
24 |
4 |
1 |
98.5 |
86.7 |
74.7 |
aP＜0.05
表2 胃粘膜組織切片三種染色菌量分級
|
染色方法 |
n |
＋ |
++ |
+++ |
－ |
陽性率(％) |
|
HE |
95 |
27 |
22 |
7b |
39 |
58.9 |
|
Giemsa |
95 |
16 |
24 |
28 |
27 |
71.6 |
|
改良W－S |
95 |
14 |
30 |
27 |
24 |
74.7 |
bP＜0.01
在各種方法中，改良W－S染檢出率最高，HE染最低，經(jīng)X2檢驗，差異有顯著性（P＜0.05)；尿素酶試驗、Giemsa染與改良W－S染比較，差異無顯著性（P＞0.05)；且其特異性、敏感性均在92％以上。表2之菌量分級，HE染與改良W－S染比較，差異有顯著性（P＜0.05)；Giemsa染與改良W－S染比較，差異無顯著性（P＞0.05)。
3 討論
本文對幾種常用檢測Hp感染的方法進行比較，其敏感性、特異性、檢出率及方法難易、速度、費用上均有不同。檢出率以改良W－S染最高，HE染最低；特異性以培養(yǎng)法最高。細菌培養(yǎng)是鑒定Hp陽性最可靠的方法，特異性100％，但培養(yǎng)需要一定條件和技術(shù)，影響因素多，敏感性較低，時間長，一般單位難以開展。HE染色作病理診斷的同時兼作Hp檢測。但其敏感性差，菌量分級少，Hp難以分辨。改良W－S銀染是一種檢出率最高的經(jīng)典方法，但其操作方法復雜，顯色劑難配制。每次染色需加熱、恒溫及配顯色劑，熱水沖洗不徹底，雜質(zhì)影響觀察，銀試劑貴耗時耗資。Giemsa染與改良W－S染在檢出率及菌量分級方面比較，差異均無顯著性（P＞0.05)。特異性高，方法簡單、便宜，是較理想的組織切片診斷Hp方法，這與國外學者報道一致。直接涂片Hp呈革蘭陰性菌，形態(tài)典型，有簡單，快速（1h～2h內(nèi))之特點，但敏感性低。尿素酶試驗具有快速（幾min至5h內(nèi))、簡便、經(jīng)濟、敏感性及特異性高的優(yōu)點，與直接涂片法聯(lián)用可提高敏感性及特異性。
尿素酶試驗聯(lián)合直接涂片法是檢測Hp感快速、簡單、經(jīng)濟、特異性、敏感性高的方法，有利于各級醫(yī)院臨床推廣使用；Giemsa染是較理想組織切片診斷Hp感染的方法；培養(yǎng)及改良W－S銀染可在有條件單位開展。
張 琍 曾明新 徐惠芳
衡陽醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院（衡陽 421000)
