。ㄋ)核酸外切酶
大腸桿菌核酸外切酶Ⅲ(exonuclease Ⅲ)是從帶3’-OH末端的雙鏈DNA,按3’→5’方向切除5’單核苷酸:
大腸桿菌核酸外切酶Ⅶ則是從單鏈DNA的3’端和5’端切除寡核苷酸(兩種形式):
。1)(2)
前一種酶需要鎂離子作輔助因子才有活性;后一種酶則不需鎂離子,因此即使在有螯合劑EDTA的情況下也有活性。另一種從噬菌體λ感染的大腸桿菌中提取的λ核酸外切酶是從帶有5’磷酸末端的雙鏈DNA上,逐個(gè)切除5’單核苷酸,在反應(yīng)時(shí)需要鎂離子:
。ㄎ)核酸酶S1
核酸酶S1(nuclease S1)主要是降解單鏈DNA或單鏈RNA。對單鏈DNA的活性更高。它的用途是切除DNA片段的單鏈末端使之成為平頭末端,切開合成dscDNA時(shí)形成的“發(fā)夾”環(huán)以及分析DNA-RNA雜合子的結(jié)構(gòu)。
(六)DNA酶
DNA酶Ⅰ(DNaseⅠ)是隨機(jī)水解雙鏈或單鏈DNA的一種內(nèi)切酶,使DNA分子降解成帶有5’磷酸末端的單核苷酸和寡核苷酸的混合物:
在進(jìn)行重組DNA研究時(shí),必須注意防止DNA酶的污染,否則制備的DNA樣品將會(huì)降解。因此器皿或試劑高溫處理,樣品中加EDTA,或放置冰上以破壞或抑制酶活性。
。ㄆ)RNA酶
RNA酶A(ribonuclease A)作用于嘧啶核苷酸的3’磷酸根上,切開與相鄰核苷酸連接的5’磷酸鍵。另一種RNA酶T1只作用于鳥嘌呤核苷酸的3’磷酸根,切開與相鄰核苷酸連接的5’磷酸鍵。人體的分泌物如唾液,汗液中都含有RNA酶。因此在操作RNA樣品時(shí),必須戴手套,實(shí)驗(yàn)用的玻璃器皿都要經(jīng)250℃烘烤4h(RNA酶耐熱),或用RNA酶的抑制劑處理。醫(yī)學(xué).全.在線.網(wǎng).站.提供
。ò)連接酶
最常用的是T4DNA連接酶(T4DNa ligase),催化雙鏈DNA中相鄰的3’OH與5’磷酸根之間形成磷酸二酯鍵,它可用來連接具有粘性末端的兩個(gè)DNA片段,或連接兩個(gè)平頭末端的DNA片段,使之成為一個(gè)重組DNA分子?墒沁@種酶只能連接雙鏈DNA而不能連接單鏈DNA分子。T4RNA連接酶則可在單鏈DNA分子或RNA分子的5’磷酸根和3’-OH之間催化生成共價(jià)鍵。
(九)末端轉(zhuǎn)移酶
末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(terminal deoxynucleotide transferase)的作用是將脫氧核苷酸加到DNA分子的3’-OH末端。
(十)堿性磷酸酶
從DNA或RNA的三磷酸脫氧核糖核苷酸或三磷酸核糖核苷酸上除5’-磷酸根殘基。一般的用途是用這種酶處理DNA或RNA后,在5’端上標(biāo)記32P。在經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切DNA片段后,用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase)處理可以阻止酶切的片段自身連接,這在克隆DNA片段時(shí)特別有用。