1.3.3 試劑:人抗多克隆抗體(武漢博士德生物技術(shù)公司),SP試劑盒(北京中山生物技術(shù)公司),氨丙基三乙氧基硅烷(APES)(北京中山生物技術(shù)公司)。
1.3.4 HE染色:①胃組織做4 μm連續(xù)切片,經(jīng)漂片后貼附于經(jīng)充分沖洗經(jīng)APES處理過的載玻片上。撈片后置烤箱60℃,45 min,使切片緊密薪附、染色。②ET1、VEGF、HIF1免疫組織化學(xué)染色:石蠟包埋的胃組織以4 μm的厚度連續(xù)切片,按試劑盒步驟進(jìn)行3種因子的免疫組織化學(xué)染色。③免疫組織化學(xué)染色對(duì)照設(shè)置:以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗進(jìn)行上述染色,作為空白對(duì)照,結(jié)果為陰性。棕褐色為陽性染色。
1.3.5 免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):染色后光鏡下做定性觀察。取200倍高倍視野下VEGF顯色最強(qiáng)的一個(gè)視野,通過顯微攝影系統(tǒng)攝取圖像,在圖像分析儀上應(yīng)用免疫組化計(jì)算面積軟件做定量分析代表陽性面積率。
1.3.6 PHG積分判定標(biāo)準(zhǔn):PHG程度按改良的McMrmark’s分級(jí)分為:無,得0分;輕度為蛇皮征和(或)淡紅色斑點(diǎn),得1分;重度為櫻桃紅斑得2分;出血得3分。PHG積分判定由3位有經(jīng)驗(yàn)的胃鏡室醫(yī)師盲法評(píng)估。
1.3.7 食道靜脈曲張判定標(biāo)準(zhǔn):按2000年3月昆明的《食管靜脈曲張內(nèi)鏡下診斷和治療規(guī)范試行方案》,將食道靜脈曲張分為輕、中、重度醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站m.52667788.cn。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料以±s表示,各組間分析用單因素隨機(jī)區(qū)組方差分析(oneway ANOVA),計(jì)數(shù)資料相關(guān)性檢驗(yàn)采用成組設(shè)計(jì)多個(gè)樣本比較的秩和檢驗(yàn)(KruskalWallis 法),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 PHG患者的內(nèi)鏡下表現(xiàn) 內(nèi)鏡下可見PHG特征性的表現(xiàn)馬賽克征、紅點(diǎn)征、櫻桃紅斑。食管靜脈曲張內(nèi)鏡下可見食管呈蛇行迂曲或串珠狀結(jié)節(jié)狀,有的可見紅色征。
2.2 PHG患者胃黏膜病理表現(xiàn) 光鏡觀察黏膜毛細(xì)血管彌漫性擴(kuò)張,大多有紅細(xì)胞滲出,黏膜固有層充血水腫,炎癥不明顯。
2.3 PHG積分與食管靜脈曲張程度的相關(guān)性分析 PHG積分與食管靜脈曲張程度無相關(guān)性(HC=4.782,P>0.05)。