1.2 方法 將固定于70%乙醇中的腫瘤組織標(biāo)本經(jīng)0.9氯化鈉溶液沖洗后,放在150目的銅網(wǎng)上,下置一平皿,用眼科剪刀將組織剪碎,用眼科鑷子輕搓組織,邊搓邊用0.9氯化鈉溶液沖洗,經(jīng)300目尼龍網(wǎng)濾除細胞團塊,收集濾下的細胞懸液。1 000 r/min,離心5 min,棄上清;加入1 ml PBS將細胞懸浮計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為1×107/ml時,此懸浮液為單分散細胞懸液。將單細胞懸液分裝3管(陰性、陽性對照組及實驗組),實驗組加入雄激素受體抗體100 μl,充分振搖,36℃避光反應(yīng)30 min;實驗組及陽性對照組各加入二抗100 μl,避光反應(yīng),然后進行FCM檢測。兔抗多克隆雄激素受體抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。
1.3 結(jié)果判定 AR經(jīng)流式細胞儀檢測后所得結(jié)果為具體數(shù)值,無需判定。對標(biāo)本組織同時行免疫組化檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為:ER、PR陽性表達為細胞胞核呈棕黃色顆粒,Her2陽性染色位于胞膜,陽性標(biāo)準(zhǔn)為胞膜染色或胞膜、胞漿同時染色。每張切片中陽性細胞<25%或無陽性細胞為陰性,陽性細胞>25%為陽性。
1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件,計量資料以±s表示多組間比較用方差分析,兩組間比較采用t檢驗,相關(guān)分析采用直線相關(guān)和等級相關(guān),P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 AR在乳腺癌中的表達 AR值最小值為291.79,最大值為512.49,平均為(361±58)。
2.2 乳腺癌組織中的AR表達與臨床特點、病理參數(shù)的相關(guān)性 60例乳腺癌組織中AR的不同表達與腫瘤大小、組織學(xué)分級、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、月經(jīng)情況、ER、PR、HER2比較情況見表1。我們得到以下結(jié)果:AR的表達與腫瘤大小有關(guān)聯(lián),腫瘤≤2 cm者,雄激素受體表達較高(427±42),與2~5 cm腫瘤及﹥5 cm腫瘤(343±32,314±29)相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000);其表達與組織學(xué)分級有關(guān)聯(lián),組織學(xué)分級Ⅰ級者雄激素受體表達值較高(447±50),與Ⅱ、Ⅲ級者(357±31,322±38)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。與ER蛋白表達呈正相關(guān)(r=0.347,P=0.000)。與TNM分期、絕經(jīng)與否,PR、Her2及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況不相關(guān)(P>0.05)。表1 AR表達與乳腺癌臨床特點、病理指標(biāo)的關(guān)系
3 討論
AR屬于核受體超家族成員,主要存在于靶細胞的核內(nèi)。人AR基因定位于X染色體長臂(Xq11~12),含有8個外顯子和7個內(nèi)含子,全長約90 kb,編碼918個氨基酸。AR有4個功能結(jié)構(gòu)域,分別是低保守的氨基端結(jié)構(gòu)域、高保守的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)與高保守的羧基端配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域,不同的結(jié)構(gòu)域有不同的功能[7]。AR調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活化主要是通過氨基端和羧基端兩個結(jié)構(gòu)域來完成的醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站m.52667788.cn。
本研究發(fā)現(xiàn),AR表達與腫瘤大小、組織學(xué)分級呈負(fù)相關(guān)。即腫瘤越小、組織學(xué)分級越低,AR的表達越高,我們的研究結(jié)果與Ogawa等[8,9]的研究一致。Ogawa等[8]應(yīng)用免疫組化法檢測227例原發(fā)性乳腺癌中AR的表達,發(fā)現(xiàn)越小的腫瘤AR陽性率越高(P=0.045),Monifar等[9]應(yīng)用抗AR單克隆抗體對乳腺癌標(biāo)本進行檢測發(fā)現(xiàn)AR在Ⅰ級的腫瘤表達為88%,在Ⅱ級和Ⅲ級的腫瘤中分別為71%和47%。表明AR的高表達可能預(yù)示腫瘤惡性程度較低。
我們的研究還發(fā)現(xiàn),AR的表達與ER的陽性表達率呈正相關(guān),即ER陽性者AR的表達高,與文獻報道相似[8,9]。Ogawa等[8]研究發(fā)現(xiàn)AR與ER表達相關(guān)(P=0.027)。Monifar等[9]的研究表明:90%分化Ⅰ級的侵襲性癌與55%分化Ⅱ級的侵襲性癌表現(xiàn)為ER+/AR+,而絕大多數(shù)分化Ⅲ級的侵襲性癌表現(xiàn)為ER/AR。因為目前一般認(rèn)為ER的表達是預(yù)后良好與否的指標(biāo),即ER陽性者預(yù)后較好,而AR的表達又與ER呈正相關(guān),所以AR的高表達也可能預(yù)示著預(yù)后良好。國外文獻已有相關(guān)報道[4,10] 。Agrawal等[10]研究表明AR陽性者5年內(nèi)的局部復(fù)發(fā)率為22.6%(48/212),陰性者的局部復(fù)發(fā)率為52.2% (144/276)。在所有局部復(fù)發(fā)患者中,AR陽性者所占比率為25%,明顯低于AR陰性者(占75%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.023)。Shippinger等[4]的研究也有相似發(fā)現(xiàn),即AR陽性患者復(fù)發(fā)后的平均生存時間(21.89個月)高于AR陰性患者(11.99月)。我們的研究還需進行長期隨訪,才能得出預(yù)后結(jié)論。我們的研究沒有發(fā)現(xiàn)AR與Her2、PR、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和絕經(jīng)與否有關(guān)。