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1 材料和方法
1.1 試劑 卵白蛋白（OVA)Ⅴ級和Histopaque分離液（Histopaque 1119和Histopaque 1083)購自美國sigma公司；山羊抗大鼠MMP-9一抗試劑盒購自美國Santa Cruz公司，兔抗羊二抗試劑盒和TIMP-1 ELISA試劑盒購自上海晶美公司。布地奈德由阿斯利康公司生產(chǎn)。
1.2 實驗動物及分組 SPF級健康雄性SD大鼠30只，平均體重（234±19)g，由溫州醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供[動物批號：SCXK（浙)2005-0019]，SPF級環(huán)境中飼養(yǎng)。隨機分成3組，每組10只，分為哮喘組（A組)、布地奈德治療組（B組)和正常對照組（C組)。
1.3 動物模型的復(fù)制[3] 方法為：第1天和第8天腹腔注射OVA/Al(OH)3混合液1 mL[含OVA 1 mg和Al(OH)3 100 mg]致敏，各1次。第15天開始每天向大鼠噴霧1% OVA 30 min，連續(xù)激發(fā)7 d。大鼠表現(xiàn)為煩躁不安、瘙癢、喘鳴、腹肌抽搐等癥狀。C組致敏和激發(fā)均以生理鹽水替代OVA和Al(OH)3。B組處理基本同A組，不同的是在抗原首次激發(fā)前24 h和每次激發(fā)前1 h給予霧化吸入布地奈德2 mg/組。
1.4 血PMN的分離純化[4] 末次激發(fā)24 h后，1%戊巴比妥30 mg/kg腹腔注射麻醉，心臟抽血4 mL，抗凝后加至備有Percoll分離液（Histopaque 1119和Histopaque 1083各4 mL)的離心管中，離心（700 r/min，4 ℃)30 min，取PMN富集層，低滲法溶解紅細(xì)胞，臺盼藍(lán)染色查細(xì)胞活力>86%，瑞氏染色顯示PMN純度>89%。另抽血1 mL靜置后取血清，ELISA法檢測TIMP-1蛋白的濃度。
1.5 肺組織和支氣管肺泡灌洗液（BALF)的制備灌洗前先結(jié)扎左肺門，取左肺組織，經(jīng)常規(guī)固定、石蠟包埋、切片，HE染色400倍光鏡下觀察肺組織的病理改變和炎性細(xì)胞浸潤情況，免疫組織化學(xué)法測定MMP-9的表達(dá)。BALF的留取操作如下：氣管插管，支氣管肺泡灌洗3次（每次5 mL生理鹽水)，回收BALF，離心(4 ℃，3 000 r/min)10 min，沉渣經(jīng)PBS重懸后行細(xì)胞總數(shù)計數(shù)和分類計數(shù)醫(yī).學(xué)全.在.線m.52667788.cn。
1.6 免疫細(xì)胞化學(xué)法 采用SP法，操作按說明書進(jìn)行。主要包括抗原修復(fù)，3% H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶，兔血清封閉液，滴加一抗、二抗及鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶復(fù)合物，DAB顯色、復(fù)染、封固，PBS代替一抗進(jìn)行陰性對照。每張細(xì)胞涂片隨機計數(shù)50個陽性細(xì)胞，Image-pro Plus 5.1免疫組化圖像分析系統(tǒng)對陽性細(xì)胞進(jìn)行灰度掃描，取其平均值代表該片的光密度（OD)值。
1.7 統(tǒng)計學(xué)處理方法 采用單因素方差分析法的LSD法分析。兩變量的相關(guān)分析采用直性相關(guān)分析法分析。
2 結(jié)果
2.1 肺組織病理改變 大鼠肺組織切片HE染色顯示：C組細(xì)支氣管形態(tài)規(guī)則、偶見炎性細(xì)胞浸潤，管腔內(nèi)見較少分泌物，上皮完整，肺泡形態(tài)規(guī)則；A組可見細(xì)支氣管形態(tài)不規(guī)則，見較多的炎性細(xì)胞浸潤，管壁增厚，黏液栓形成，杯狀細(xì)胞增生，部分支氣管上皮細(xì)胞排列不完整、可見炎性細(xì)胞嗜上皮現(xiàn)象。B組細(xì)支氣管的炎癥改變較A組顯著減輕。
2.2 BALF中白細(xì)胞計數(shù) A組BALF中細(xì)胞總數(shù)及淋巴細(xì)胞（LYM)、PMN和嗜酸細(xì)胞（EOS)的百分比均顯著高于C組（均P <0.01)，巨噬細(xì)胞（MФ)的百分比顯著低于C組（P <0.01)。與C組相比，B組BALF中細(xì)胞總數(shù)及EOS、PMN的百分比均顯著升高（P <0.01或P <0.05)，MФ的百分比顯著降低（P <0.05)，LYM的百分比差異無顯著性（P >0.05)。與A組相比，B組BALF中細(xì)胞總數(shù)及EOS、LYM的百分比均顯著降低（P <0.01或P <0.05)，MФ的百分比顯著升高（P <0.01)，PMN的百分比差異無顯著性（P >0.05)(見表1)。
2.3 PMN中MMP-9的表達(dá) 陽性細(xì)胞的胞漿呈棕黃色表達(dá)，3組中PMN均有不同程度的表達(dá)。A組中PMN中MMP-9的表達(dá)水平顯著高于C組（P <0.01)，B組PMN中MMP-9的表達(dá)水平顯著低于A組且高于C組（均P <0.01)（見表2、圖1)。
2.4 血清TIMP-1的表達(dá) A組血清TIMP-1的表達(dá)水平顯著高于C組（P <0.01)，B組血清TIMP-1的表達(dá)水平顯著低于A組且高于C組（P <0.05或P <0.01)（見表2)。
2.5 MMP-9與TIMP-1的相關(guān)性 MMP-9與TIMP-1的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(n=29，r=0.713 P <0.01)。
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