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內(nèi)科學(xué)論文:萊菔硫烷對TNF—α誘導(dǎo)bEnd.3鼠腦血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生IL—1β的影響
[摘要] 目的 研究萊菔硫烷（sulforaphane，SFN)對TNF-α誘導(dǎo)bEnd.3鼠腦血管內(nèi)皮細胞IL-1β的影響。 方法 體外培養(yǎng)腦血管內(nèi)皮細胞系bEnd.3，TNF-α刺激前先用30 μg/mL SFN處理2 h，MTT法檢測細胞的活性，ELISA檢測IL-1β和血紅素氧合酶（heme oxygenase，HO-1)的產(chǎn)生。 結(jié)果 （0～30) μg/mL SFN對bEnd.3細胞無明顯毒性作用。TNF-α能顯著誘導(dǎo)bEnd.3細胞產(chǎn)生IL-1β，并能表達一定量的HO-1。經(jīng)SFN處理后，HO-1表達量增高，且IL-1β產(chǎn)生明顯降低。此外，HO-1激動劑CoPP處理能協(xié)同SFN降低TNF-α誘導(dǎo)的IL-1β產(chǎn)生，HO-1抑制劑ZnPP能減弱SFN對IL-1β的抑制作用。 結(jié)論 SFN通過上調(diào)HO-1的產(chǎn)生從而抑制TNF-α誘導(dǎo)bEnd.3細胞分泌IL-1β。
[關(guān)鍵詞] 萊菔硫烷；腦血管內(nèi)皮細胞；血紅素氧合酶-1；IL-1β
[中圖分類號] R741 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2013)10-0001-02
腦血管內(nèi)皮細胞是血腦屏障重要組成部分，各種因素如缺氧等導(dǎo)致其功能異常后直接引起腦血管通透性增高和血管源性腦水腫，并最終導(dǎo)致腦神經(jīng)細胞損傷[1]。腦損傷程度及預(yù)后不僅取決于腦缺血缺氧的范圍和程度，而且與缺血-再灌注損傷的發(fā)生密切相關(guān)。其中氧自由基連鎖反應(yīng)是神經(jīng)元受損的核心病理環(huán)節(jié)[2，3]。生理條件下，機體內(nèi)自由基的生成和清除之間保持動態(tài)平衡，但在某些病理生理條件下，自由基產(chǎn)生過多或清除不足時就會造成組織損傷。腦組織由于富含脂質(zhì)，本身抗氧化作用比較弱，對缺氧的耐受性低，因此最容易受到自由基的攻擊。氧自由基一方面直接使脂質(zhì)、蛋白質(zhì)過氧化，使細胞發(fā)生不可逆改變；另一方面通過刺激細胞因子、黏附分子以及各種炎性相關(guān)介質(zhì)的表達，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)從而加重腦組織損傷，最終導(dǎo)致神經(jīng)元缺血壞死[4，3]。本研究旨在觀察萊菔硫烷對TNF-α誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生IL-1β的影響，并探討其可能的作用機制。
1 材料與方法
1.1 主要材料與試劑
鼠永生化腦血管內(nèi)皮細胞系bEnd.3購自ATCC。培養(yǎng)基DMEM、胎牛血清購自Invitrogen；SFN（分子量177. 3，純度98.3%)購自美國Alexis公司；鈷原卟啉 Ⅸ（CoPP)，鋅原卟啉 Ⅸ（ZnPP)為Sigma-Aldrich產(chǎn)品，HO-1和IL-1β ELISA試劑盒購自欣博盛生物科技有限公司醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站m.52667788.cn。
1.2 細胞培養(yǎng)與處理
bEnd.3細胞用含20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。實驗分為正常對照組、TNF-α模型組和SFN干預(yù)組。其中對照組僅加入0.1%DMSO，模型組細胞加入5 ng/mL TNF-α；SFN不同濃度干預(yù)組在模型組基礎(chǔ)上分別加入5 μg/mL、10 μg/mL、30 μg/mL SFN，于24 h后收集細胞。
