藿膽丸－鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸的測定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測定藿膽丸中鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸的含量。

本方法適用于中成藥藿膽丸。

供試品加入氫氧化鈉加熱皂化，冷卻，離心。取上清液，用濃鹽酸調(diào)PH值，氯仿萃取，回收氯仿蒸干，殘渣用無水乙醇溶解，制成供試液，點樣、展開，以5%硫酸乙醇溶液顯色，用熒光薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長λ＝366nm測量鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸吸收度積分值，計算其含量。

1. 正己烷

2 .甲醇

3 .醋酸乙酯

4 .醋酸

5 .5％硫酸乙醇

1 儀器

1.1 定量毛細(xì)管

1.2 薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點樣器

1.5展開室

2材料

2.1玻板

用20cm ×10cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

1, 對照品溶液的制備

分別精密稱取鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸各1.0mg，置同一5.0mL容量瓶中，以無水乙醇制成各含0.2mg/mL的溶液，作為對照品溶液。

2, 供試品溶液的制備

精密稱取供試品粉末（過五號篩-80目)約1g，置三角瓶中，加40％氫氧化鈉溶液20mL，加熱120℃皂化5小時，冷卻，離心，吸取上清液，濾渣水洗3次，每次30mL，合并上清液，加濃鹽酸調(diào)PH1－2，氯仿萃取5次，每次40mL，合并萃取液，用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾渣用30mL氯仿洗滌，回收氯仿蒸干，殘渣用無水乙醇溶于25mL容量瓶中，加至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

1.薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.點樣

精密吸取供試品溶液適量，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，如用點樣器點樣到薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大于2mm，點間距離可視斑點擴散情況，以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

3.展開

將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（20:25:2:3)10℃以下放置12小時的下層溶液為展開劑，展開至8～15cm時，取出薄層板，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，在100℃烘烤7～8分鐘，取出，晾干。

4.含量測定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采熒光法線性掃描，激發(fā)波長λ＝366nm測定鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算。

林彤、朱品業(yè). 熒光薄層掃描測定藿膽丸中豬去氧膽酸（HDCA)和鵝去氧膽酸（CDCA)的含量. 廣東藥學(xué)，1994，(4)：19-20.