藿膽丸－豬去氧膽酸和鵝去氧膽酸的測(cè)定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測(cè)定藿膽丸中豬去氧膽酸和鵝去氧膽酸的含量。

本方法適用于霍膽丸中豬去氧膽酸和鵝去氧膽酸含量的測(cè)定。

供試品置電高壓滅菌鍋內(nèi)皂化，冷卻，濾過(guò)，離心，取上清液，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值，用氯仿振搖提取，合并氯仿提取液，加無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，濾液回收氯仿至干，殘?jiān)�加無(wú)水乙醇使溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開(kāi)，以5％硫酸乙醇溶液顯色，用薄層掃描儀進(jìn)行熒光掃描，于激發(fā)波長(zhǎng)λ=366 nm測(cè)量豬去氧膽酸（C₂₉H₄₀O₄)和鵝去氧膽酸（C₂₄H₄₀O₄)熒光強(qiáng)度的積分值，計(jì)算其含量。

1. 乙醚

2 .氫氧化鈉

3 .氯仿

4 .無(wú)水硫酸鈉

5 .無(wú)水乙醇

6 .正己烷

7 .醋酸

8 .醋酸乙酯

9 .甲醇

10. 硫酸 5％硫酸乙醇溶液

11 .乙醇

12 .鹽酸

1 儀器

1.1電高壓滅菌鍋

1.2薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.5展開(kāi)室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸對(duì)照品適量，分別加無(wú)水乙醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

精密稱取供試品細(xì)粉約1g，置錐形瓶中，加入40%氫氧化鈉溶液20mL，搖勻，置電高壓滅菌鍋內(nèi)，在 120℃皂化 5小時(shí)，冷卻，濾過(guò)，藥渣用水洗滌 3次，每次 20mL，離心，取上清液，合并三次離心液，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至約1，用氯仿振搖提取4次（40mL、40mL、30mL、30mL)，合并氯仿提取液，加無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，用氯仿30mL分次洗滌無(wú)水硫酸鈉及濾器，洗液并入濾液，回收氯仿至干，殘?jiān)�加無(wú)水乙醇使溶解，置 25mL量瓶中，用適量無(wú)水乙醇洗滌容器，洗液并入量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1. 薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2 .點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液2μL、上述兩種對(duì)照品溶液各1μL與4μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3. 展開(kāi)

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中，以正己烷－醋酸乙酯－醋酸－甲醇（20：25：2：3)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，于100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出。

4.含量測(cè)定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，進(jìn)行熒光掃描，激發(fā)波長(zhǎng)：λ=366 nm， 測(cè)量供試品熒光強(qiáng)度的積分值與對(duì)照品熒光強(qiáng)度的積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過(guò)原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過(guò)原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編、化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部p.663。