| 公開(公告)號 | CN1281743C |
| 公開(公告)日 | 2006.10.25 |
| 申請(專利)號 | CN200410039186.8 |
| 申請日期 | 2004.02.20 |
| 專利名稱 | 蚓激酶干粉的制備方法 |
| 主分類號 | C12N9/64(2006.01)I |
| 分類號 | C12N9/64(2006.01)I;A61K38/17(2006.01)I;A61P9/14(2006.01)I;A61P7/02(2006.01)I;A61P9/10(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 北京百奧藥業(yè)有限責(zé)任公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 萬興中 |
| 地址 | 100080北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一街3號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 王鳳華 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種蚓激酶干粉的制備方法，包括如下步驟： 1)蚯蚓清洗：將活蚯蚓用水清洗后，按每公斤蚯蚓加入0.1～0.3公斤糖，或0.2～0.4公斤氯化鈉，在室溫下攪拌均勻，靜置20～40分鐘，然后用30～50℃的溫水將蚯蚓身上的糖或氯化鈉及污物洗去； 2)制漿：加入蚯蚓體積的1～8倍的水，用珠磨、膠體磨機或高壓勻漿機將經(jīng)步驟1)清洗過的蚯蚓進行細胞破碎，制成勻漿； 3)除渣：將步驟2)得到的勻漿通過過濾或離心除去其中的粗渣；所述的過濾是采用濾網(wǎng)孔徑為5～20mm的不銹鋼過濾器過濾； 4)澄清：經(jīng)步驟3)除渣后的勻漿液，采用高速離心機或微孔膜過濾器處理2小時，得到澄清液； 5)分離：采用DEAE-陰離子交換層析柱或DEAE Affi Gel Blue三嗪染料親和層析柱分離步驟4)得到的蚯蚓澄清液，用0.01～0.8M的醋酸鹽溶液、磷酸鹽溶液及0.01～1.8M的氯化鈉溶液洗脫，收集活性峰部分的層析流出液； 6)濃縮脫鹽：將步驟5)收集的層析液過濾以除去無機鹽和小分子物質(zhì)，脫去大部分水，使蛋白濃度達到20g/L，且濃縮液電導(dǎo)率≤0.15×103μs/cm時結(jié)束脫鹽，得到除鹽濃縮液；所述的過濾是采用標準截流分子量為0.5～50K的平板膜、卷式膜或中空纖維超濾裝置進行的； 7)澄清過濾：采用孔徑為0.45～2μm的深層微孔膜或折疊式膜微孔膜過濾裝置，濾除步驟6)得到的除鹽濃縮液中的懸浮顆粒，得到澄清液； 8)除菌：采用0.22μm的除菌濾膜過濾裝置及輻照裝置處理步驟7)的澄清液，除去菌體； 9)干燥：在無菌條件下將步驟8)除菌后的澄清液于-30～-40℃下冷凍8～12小時；然后在0.2mmHg的真空度下，升溫至25～30℃，干燥10小時；繼續(xù)升溫至36～38℃，真空干燥14～15小時，得到蚓激酶干粉。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種蚓激酶干粉的制備方法，該方法包括如下步驟：將活蚯蚓用水清洗后，置于糖或氯化鈉中，在室溫下靜置，刺激蚯蚓將其消化道內(nèi)的分泌物吐盡；然后加入蚯蚓體積的1～8倍的水，進行細胞破碎，制成的勻漿經(jīng)過除渣、澄清處理后，采用陰離子交換層析柱或親和層析柱分離，收集活性峰部分的流出液，濃縮脫鹽后再過濾、除菌；將得到的澄清液于-30～-40℃下冷凍；然后在真空下干燥，得到蚓激酶干粉，或是在無菌條件下將澄清液于噴霧干燥機內(nèi)，經(jīng)壓縮空氣霧化后脫水，得到蚓激酶干粉。該方法得到的蚓激酶干粉中有效組分含量高、質(zhì)量易控、且易于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。 |
| 國際公布 |
