公開(公告)號
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CN1737149A
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公開(公告)日
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2006.02.22
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申請(專利)號
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CN200510035634.1
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申請日期
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2005.07.07
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專利名稱
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一種用于分離抗栓物質(zhì)的定向進化方法及其分離的抗栓物質(zhì)與純化方法
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主分類號
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C12N15/62(2006.01)I
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分類號
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C12N15/62(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N15/87(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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劉秋云;何建國
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發(fā)明(設(shè)計)人
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劉秋云;何建國;李子勁
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地址
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510275廣東省廣州市新港西路135號中山大學(xué)生物工程研究中心
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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廣州粵高專利代理有限公司
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代理人
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陳 衛(wèi)
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國省代碼
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廣東;44
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主權(quán)項
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一種用于分離抗栓物質(zhì)的定向進化方法,其包括如下步驟:(1)構(gòu)建酵母α交配因子前導(dǎo)肽與部分隨機肽的融合DNA片段;(2)插入雙酶切并用堿性磷酸酶處理的含有誘導(dǎo)型啟動子的穿梭載體;(3)穿梭載體電激轉(zhuǎn)化大腸桿菌,提取質(zhì)粒后電激轉(zhuǎn)化釀酒酵母;(4)轉(zhuǎn)接轉(zhuǎn)化子至棉子糖/半乳糖液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基,誘導(dǎo)培養(yǎng);(5)取培養(yǎng)物,離心取上清,調(diào)pH至中性,加入凝血酶,混勻;1分鐘后加入纖維蛋白原,混勻;取無沉淀產(chǎn)生、沉淀量少或產(chǎn)生沉淀時間相對長的活性轉(zhuǎn)化子;
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摘要
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本發(fā)明公開了一種用于分離抗栓物質(zhì)的定向進化方法及其分離的抗栓物質(zhì)與純化方法。本發(fā)明通過構(gòu)建酵母α交配因子前導(dǎo)肽與部分隨機肽的融合DNA片段;插入雙酶切并用堿性磷酸酶處理的含有誘導(dǎo)型啟動子的穿梭載體;電激轉(zhuǎn)化大腸桿菌,提取質(zhì)粒后電激轉(zhuǎn)化釀酒酵母;轉(zhuǎn)接轉(zhuǎn)化子至棉子糖/半乳糖液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基;取誘導(dǎo)了7天的培養(yǎng)物,離心取上清;做抑制凝血酶試驗,篩選陽性轉(zhuǎn)化子。本發(fā)明的定向進化方法能簡單、高效地發(fā)現(xiàn)抗栓肽;這將為抗栓藥物和其它藥物開發(fā)開辟新途徑。
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國際公布
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