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天然折疊和分泌型蛋白質(zhì)的制備方法

公開(公告)號 CN1231594C  
公開(公告)日 2005.12.14  
申請(專利)號 CN00105974.2  
申請日期 2000.04.24  
專利名稱 天然折疊和分泌型蛋白質(zhì)的制備方法  
主分類號 C12P21/00  
分類號 C12P21/00  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 1999.4.26 EP 99107412.1  
申請(專利權(quán))人 霍夫曼-拉羅奇有限公司  
發(fā)明(設(shè)計)人 多蘿特·安布羅修斯;賴納·魯?shù)婪?約爾格·舍夫納;伊麗莎白·施瓦茨  
地址 瑞士巴塞爾  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 中科專利商標代理有限責任公司  
代理人 兆元  
國省代碼 瑞士;CH  
主權(quán)項 生產(chǎn)一種含有通過二硫鍵連接的二個或幾個半胱酸的、水溶性的、天然折疊真核多肽的方法,其是通過在多肽分泌到周質(zhì)或培養(yǎng)基中的條件下培養(yǎng)原核生物的細胞,切除信號序列,并從周質(zhì)或培養(yǎng)基中分離該多肽進行的,其中所說的原核生物的細胞含有編碼所說的在N-末端含有原核生物的信號序列的多肽的一個表達載體,其中該培養(yǎng)是在有精氨酸或通式(I)的一種化合物存在下進行的R2-CO-NRR1(I)其中R和R1代表氫或一種飽和的或不飽和的支鏈或直鏈C1-C4烷基鏈和R2代表氫、NHR1或飽和的或不飽和的支鏈或直鏈C1-C3烷基鏈和以0.1mol/l-5mol/l的濃度將精氨酸或通式I的化合物添加到營養(yǎng)培養(yǎng)基,和以0.1mmol/l-15mmol/l的濃度將還原性硫醇試劑添加到營養(yǎng)培養(yǎng)基中。  
摘要 一種通過培養(yǎng)原核生物的細胞生產(chǎn)一種通過二硫鍵連接二個或幾個半胱氨酸的、水溶性的、天然折疊真核多肽的方法,a)其中所說的原核細胞含有編碼所說的在N-末端含有原核生物的信號序列的多肽的一個表達載體,b)在多肽分泌到周質(zhì)或培養(yǎng)基中的條件下,c)切除信號序列,并從周質(zhì)或培養(yǎng)基中分離該多肽。其中該培養(yǎng)是在有精氨酸或通式(I)的一種化合物存在下進行的R2-CO-NRR1(I)其中R和R1代表氫或一種飽和的或不飽和的支鏈或直鏈C1-C4烷基鏈和R2代表氫、NHR1或飽和的或不飽和的支或直鏈C1-C3烷基鏈,該方法適于用原核生物以高產(chǎn)率重組生產(chǎn)多肽。  
國際公布  
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