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人類細(xì)胞周期素A基因的提取與純化方法

公開(公告)號(hào) CN1696303A  
公開(公告)日 2005.11.16  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200510016716.1  
申請(qǐng)日期 2005.04.18  
專利名稱 人類細(xì)胞周期素A基因的提取與純化方法  
主分類號(hào) C12P19/34  
分類號(hào) C12P19/34;C07H21/04  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 曲曉剛;包蕙心  
地址 130022吉林省長(zhǎng)春市人民大街5625號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 長(zhǎng)春科宇專利代理有限責(zé)任公司  
代理人 馬守忠  
國(guó)省代碼 吉林;22  
主權(quán)項(xiàng) 一種人類細(xì)胞周期素A基因的提取與純化方法,其步驟包括(1)從大腸桿菌中用堿裂解法提取質(zhì)粒pGEM-人類細(xì)胞周期素A基因,其特征在于還包括如下步驟:(2)提取的質(zhì)粒pGEM-人類細(xì)胞周期素A基因用限制性內(nèi)切酶EcoRI消化稱之為酶切法,具體的酶切方法是采用如下的物質(zhì)與配比:限制性酶切酶EcoRI4~8μl10×緩沖液5~10μl帶有人細(xì)胞周期素A基因的質(zhì)粒45~50μl滅菌水80~90μl保持總體積:150μl反應(yīng)條件:溫度為35~40℃,時(shí)間為8~24小時(shí)質(zhì)粒pGEM-人類細(xì)胞周期素A基因濃度為10~15μg(3)待質(zhì)粒pGEM-人類細(xì)胞周期素A基因消化完全后,用0.7%的瓊脂糖凝膠電泳分離基因片段和載體,在100V電壓下保持2.5小時(shí);人類細(xì)胞周期素A基因片段與載體經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離后,在紫外燈下將人類細(xì)胞周期素A基因條帶盡可能窄的切下來(lái),切成小塊后裝入離心管中,加入20℃的純水中正好將其淹沒(méi),放置12小時(shí),并振搖數(shù)次;然后用最大轉(zhuǎn)速1200r/min離心機(jī)離心10分鐘,使瓊脂糖膠塊沉在離心管底部,吸出的上層水溶液即為回收的人類細(xì)胞周期素A基因溶液;經(jīng)過(guò)與它的體積比為1∶1的酚—氯仿抽提去除蛋白后,裝入透析袋對(duì)水透析24小時(shí);透析后的水溶液在真空度為50×10-3Pa,溫度為-50℃的條件下,經(jīng)凍干機(jī)凍干成粉末,用緩沖液溶解;沉在離心管底部的凝膠可以再次浸泡,使人類細(xì)胞周期素A基因全部深出。  
摘要 本發(fā)明屬于人類細(xì)胞周期素A基因的制備方法,涉及一種人類細(xì)胞周期素A基因的提取與純化的方法。從大腸桿菌中提取含有基因片段的質(zhì)粒,經(jīng)過(guò)限制性內(nèi)切酶消化后,通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分離基因片段與載體,從凝膠中回收細(xì)胞周期素A基因片段并純化。這種方法不會(huì)對(duì)基因產(chǎn)生損傷,而且具有較高的回收率。本發(fā)明的方法可以用于提取和純化人類細(xì)胞周期素A基因。  
國(guó)際公布  
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