| 公開(公告)號(hào) | CN1196782C |
| 公開(公告)日 | 2005.04.13 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN01106417.X |
| 申請(qǐng)日期 | 2001.01.08 |
| 專利名稱 | 一種磷酯酶制劑的制備方法 |
| 主分類號(hào) | C12N9/16 |
| 分類號(hào) | C12N9/16;C12N1/20;//(C12N9/16,C2R1:01) |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國科學(xué)院武漢病毒研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 陳濤;孫松柏;宋建華 |
| 地址 | 430071 湖北省武漢市武昌小洪山 |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 武漢宇晨專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 王敏鋒 |
| 國省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種磷酯酶C制劑的制備方法，采用磷酯酶C單胞菌屬CW-W-90-3菌株，其特征是：A、菌種活化，將無菌水滴入菌種的凍干管中，混勻，再將菌種接在牛肉膏0.3％、蛋白胨1％、葡萄糖0.5％、NaCl0.5％的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行活化培養(yǎng)；B、種子液的培養(yǎng)，將菌種接裝有液體培養(yǎng)基的種子罐中培養(yǎng)，pH值6.5-8.0，溫度25-37℃，時(shí)間8-12小時(shí)，攪拌速度200-240r/m；C、發(fā)酵液的培養(yǎng)，將種子液接入發(fā)酵罐中，其培養(yǎng)基同種子液培養(yǎng)基，接種量5-10％，通氣量1∶0.3-0.5，高壓0.05Mpa；D、純化，將發(fā)酵液經(jīng)4000r/m離心，棄去沉淀，收集上清液，經(jīng)30-80％(NH4)2SO4分級(jí)沉淀，再經(jīng)蒸餾水溶解，離心去雜質(zhì)，脫鹽、濃縮；E、冷凍干燥，將精酶泥用蒸餾水調(diào)至含干物質(zhì)10％，并加入輔料脫脂奶粉3％，在0.05Mpa以下真空環(huán)境，-40℃冷凍4小時(shí)，再升華到0℃維持10小時(shí)，最后升溫到25℃，干燥6小時(shí)。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種磷酯酶制劑的制備方法，首先是菌種活化，將無菌水滴入菌體的凍干管中混勻，再將菌種接在固體培養(yǎng)基上進(jìn)行活化培養(yǎng)；其次是種子液的培養(yǎng)，將菌種接在裝有液體培養(yǎng)基的種子罐中培養(yǎng)；再次是發(fā)酵液的培養(yǎng)，將種子液接入發(fā)酵罐中培養(yǎng)，接種量5～10％，通氣量1∶0.3～0.5，高壓0.05MPa；第四是純化，將發(fā)酵液離心，棄去沉淀，收集上清液，分級(jí)沉淀；第五是冷凍干燥。本發(fā)明方法易行，工藝簡(jiǎn)便，酶凍干粉活力單位2000～4000u/g，具有抗血小板聚集的功能，制劑穩(wěn)定性好，適合于大批量生產(chǎn)。 |
| 國際公布 |
