| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1189559C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2005.02.16 |
| 申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) | CN03114511.6 |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.02.28 |
| 專(zhuān)利名稱(chēng) | 一種從蛇毒中分離純化類(lèi)凝血酶的方法 |
| 主分類(lèi)號(hào) | C12N9/74 |
| 分類(lèi)號(hào) | C12N9/74;C07K1/18 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 | 邊六交;祁淼 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 邊六交;楊曉燕;董妍;祁淼 |
| 地址 | 710043 陜西省西安市高新開(kāi)發(fā)區(qū)東區(qū)3號(hào)4層 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) | 西安通大專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國(guó)省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種從蛇毒中分離純化類(lèi)凝血酶的方法，其特征在于，采用陽(yáng)離子交換層析、陰離子交換層析和凝膠排阻層析三步法從蛇毒中分離純化類(lèi)凝血酶，在帶有梯度洗脫并能同時(shí)顯示紫外和電導(dǎo)參數(shù)裝置的高、中、低壓層析儀上進(jìn)行；活性測(cè)定參照胰蛋白酶測(cè)定法，用BAEE作底物；具體步驟如下：1).江浙產(chǎn)蝮蛇抗栓酶的等電點(diǎn)在4～5左右，選擇在它的等電點(diǎn)附近酸堿度的溶樣液，首先使類(lèi)凝血酶在溶樣液中以陽(yáng)離子蛋白質(zhì)形式存在，然后選擇一種可以與這樣帶電蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的陽(yáng)離子交換介質(zhì)進(jìn)行梯度洗脫，收集活性峰；2).陽(yáng)離子交換收集的含有類(lèi)凝血酶活性的餾分經(jīng)稀釋和調(diào)pH值后，上陰離子交換柱，稀釋后含NaCl在0.05M以下，pH在8.5左右，陰離子交換層析的A液可選用pH在8.5左右的PBS緩沖液或Tris-HCl緩沖液，B液為在A液中加入0.6-0M左右的NaCl溶液，梯度方式為洗脫液從A液完全變到B液時(shí)，至少?zèng)_洗10個(gè)柱體積以上，介質(zhì)選擇商品化的陰離子交換介質(zhì)，收集陰離子層析后含類(lèi)凝血酶的活性峰；3).將陰離子交換收集的含類(lèi)凝血酶的活性餾分直接上凝膠層析，收集含類(lèi)凝血酶的餾分，流動(dòng)相選用pH5.0-9.0的HAC-NaAC或PBS緩沖液，濃度在10mM-50mM之間，用等度洗脫，介質(zhì)選用商品化的凝膠介質(zhì)；4)對(duì)最后一步的最大活性峰作SDS-PAGE電泳和HPLC檢測(cè)，其純度分別約為98％和95％，脫鹽凍干后可得純類(lèi)凝血酶。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種從蛇毒中分離純化類(lèi)凝血酶的方法，采用陽(yáng)離子交換層析、陰離子交換層析和凝膠排阻層析三步法從蛇毒中分離純化類(lèi)凝血酶，在帶有梯度洗脫并能同時(shí)顯示紫外和電導(dǎo)參數(shù)裝置的高、中、低壓層析儀上進(jìn)行；活性測(cè)定參照胰蛋白酶測(cè)定法，用BAEE作底物。本發(fā)明可以方便、快速地從蛇毒中提取類(lèi)凝血酶，其純度和生物活性均可達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn)。與傳統(tǒng)方法相比較，本發(fā)明生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，回收率高，活性損失小，并可幾乎線(xiàn)性放大到工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)。 |
| 國(guó)際公布 |
