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免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn):第二節(jié) 皮膚試驗(yàn)

皮膚試驗(yàn)(skintest)簡稱皮試,是在皮膚的體內(nèi)免疫學(xué)試驗(yàn)。當(dāng)試驗(yàn)抗原進(jìn)入致敏者皮膚時(shí),皮膚中結(jié)合有IgE的肥大細(xì)胞或致敏T細(xì)胞就會與試驗(yàn)抗原結(jié)合,引發(fā)即刻型或遲發(fā)型的皮膚超敏反應(yīng)。試驗(yàn)抗原也可從注射部位進(jìn)入微血管,與循環(huán)中的相應(yīng)抗體結(jié)合,形成的免疫復(fù)合物可…

皮膚試驗(yàn)(skintest)簡稱皮試,是在皮膚的體內(nèi)免疫學(xué)試驗(yàn)。當(dāng)試驗(yàn)抗原進(jìn)入致敏者皮膚時(shí),皮膚中結(jié)合有IgE的肥大細(xì)胞或致敏T細(xì)胞就會與試驗(yàn)抗原結(jié)合,引發(fā)即刻型或遲發(fā)型的皮膚超敏反應(yīng)。試驗(yàn)抗原也可從注射部位進(jìn)入微血管,與循環(huán)中的相應(yīng)抗體結(jié)合,形成的免疫復(fù)合物可在局部沉積,激活補(bǔ)體引起炎癥。所以皮膚試驗(yàn)主要用于檢測型和型變態(tài)反應(yīng),有時(shí)也用于檢測Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)。

一、試驗(yàn)準(zhǔn)備

首先應(yīng)當(dāng)制備試驗(yàn)用抗原,如有合格商品可直接購買。可以作為變應(yīng)原的物質(zhì)種類繁多,例如動物皮毛、家禽羽毛、鴿糞、昆蟲、螨類、真菌、花粉、雜草、物理粉塵和各種食品等都可能成為變應(yīng)原。

不同抗原的制備方法不同,但一般包括以下幾個步驟:①收集原料;②粉碎與勻漿;③脫脂與提;④過濾與分離;⑤分裝保存。分裝保存之前應(yīng)對提取產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。首先必須經(jīng)過無菌試驗(yàn)、急性毒性試驗(yàn)和熱原檢查,保證提取產(chǎn)物無明顯的毒副作用;還要測定產(chǎn)物的蛋白含量,用凱氏定氮法或磷鎢酸沉淀法標(biāo)定出總氮單位或蛋白氮單位。

變應(yīng)原的范圍很廣,難以做得完全,所以查找變應(yīng)原需依靠患者的病史和醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)以將可疑范圍縮小,學(xué)樣成功的機(jī)會就大得多。一般醫(yī)院和衛(wèi)生所都能做藥物過敏試驗(yàn),多在注射室完成;防疫部位在一些免疫接種之前有時(shí)也要做皮膚試敏;其余的均在變態(tài)反應(yīng)科或檢驗(yàn)科的專門實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有專人負(fù)責(zé),除具備各種專用試驗(yàn)器材之外,還應(yīng)備有意外搶救的藥品及設(shè)施。

試驗(yàn)部位應(yīng)清洗干凈,嚴(yán)格消毒,以免皮膚的不潔物引起非特異性反應(yīng)或感染。當(dāng)皮膚患濕疹、感染、皮炎或外傷時(shí)不宜進(jìn)行皮膚試驗(yàn)。正在或近日服用免疫抑制劑或抗組胺藥物者也不宜進(jìn)行皮膚試驗(yàn)。

二、試驗(yàn)類型及方法

皮膚試驗(yàn)的最常用部位是前臂曲側(cè),因此處皮膚較為光滑細(xì)膩,而且便于試驗(yàn)操作和結(jié)果觀察。按正規(guī)作法,左右兩臂一側(cè)作試驗(yàn),另一側(cè)作對照。需要時(shí)也可選用上臂或背部皮膚。具體試驗(yàn)方法可分為皮內(nèi)試驗(yàn)(intracutaneoustest)、挑刺試驗(yàn)(pricktest)和斑貼試驗(yàn)(patchtest)。

1.皮內(nèi)試驗(yàn)將試驗(yàn)抗原與對照液各0.0~20.03ml用皮試針頭分別注入皮內(nèi)(不是皮下),使局部產(chǎn)生一個圓形小丘。當(dāng)同時(shí)試驗(yàn)多種抗原時(shí),相互間至少間隔4cm,以免強(qiáng)烈反應(yīng)時(shí)互相混淆結(jié)果。

皮內(nèi)試驗(yàn)的敏感性比其他皮膚試驗(yàn)高,所用抗原應(yīng)適當(dāng)稀釋,以免出現(xiàn)嚴(yán)重反應(yīng);當(dāng)高可疑性抗原出現(xiàn)陰性結(jié)果時(shí),應(yīng)逐漸加大抗原濃度進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。

皮內(nèi)試驗(yàn)是最常用的皮膚試驗(yàn),應(yīng)用范圍也很廣,幾乎各類抗原及各型反應(yīng)都可用皮內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)行測定,只是不同類型的反應(yīng)觀察結(jié)果的時(shí)間和判定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)不所不同。

2.挑刺試驗(yàn)也稱點(diǎn)刺試驗(yàn)或刺痕試驗(yàn)。將試驗(yàn)抗原與對照液分別滴于試驗(yàn)部位皮膚上,用針尖透過液滴或在皮膚上輕輕地挑刺一下,以刺破皮膚但以不出血為度;1min后拭(吸)去抗原溶液。同時(shí)試驗(yàn)多腫抗原時(shí),千萬注意不要將不同的抗原液交叉混合,以免出現(xiàn)假陽性。

挑刺試驗(yàn)主要用于型變態(tài)反應(yīng),該法雖比皮內(nèi)試驗(yàn)法敏感性稍低,但假陽性較少,與臨床及其他試驗(yàn)的相關(guān)性較強(qiáng)。

劃痕試驗(yàn)(scratchtest)是挑刺試驗(yàn)的一個變型,用三棱針或注射器針頭在皮膚劃一條或多條約1cm長的創(chuàng)痕。因?yàn)閯澓鄣妮p重與長短難于掌握一致,故不常用。

3.斑貼試驗(yàn)將試驗(yàn)抗原直接貼敷于皮膚表面的方法。試驗(yàn)抗原為軟膏時(shí)可直接涂沫在皮膚上;如為固體物時(shí)可用蒸餾水混合或浸濕后涂敷于皮膚上;如為水溶液則浸濕紗布后敷貼于皮膚上。所用抗原濃度以不刺激皮膚為原則,涂敷范圍以0.5~1cm為宜。涂敷后蓋以油紙或玻璃紙,用紗布或繃帶固定;如有明顯不適感可隨時(shí)打開查看,并進(jìn)行適當(dāng)處理。

斑貼試驗(yàn)主要是檢測Ⅳ型變態(tài)反應(yīng),敏感程度雖然不太高,但假陽性較少,結(jié)果的可信度大。

三、結(jié)果判定及分析

1.Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)在抗原刺激后20~30min內(nèi)觀察結(jié)果。挑刺試驗(yàn)的陽性反應(yīng)以紅暈為主,皮內(nèi)試驗(yàn)的陽性反應(yīng)則以風(fēng)團(tuán)為主,判定標(biāo)準(zhǔn)m.52667788.cn/yishi/見表24-2。

表24-2 速發(fā)型皮膚試驗(yàn)的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

反應(yīng)程度皮內(nèi)試驗(yàn)挑刺試驗(yàn)
無反應(yīng)或小于對照無反應(yīng)或小于對照
風(fēng)團(tuán)3~5min,紅暈<20mm紅暈>對照,≤20nm
++風(fēng)團(tuán)6~9mm,伴紅暈紅暈>20mm,無風(fēng)團(tuán)
+++風(fēng)團(tuán)10~15mm,伴紅暈紅暈伴有風(fēng)團(tuán)
++++風(fēng)團(tuán)>15mm,紅暈伴偽足紅暈伴偽足和風(fēng)團(tuán)

2.Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)在接觸抗原后48~72h內(nèi)觀察結(jié)果。皮內(nèi)試驗(yàn)的陽性結(jié)果以紅腫和硬結(jié)為主,斑貼試驗(yàn)的陽性結(jié)果以紅腫和水皰為主。判定標(biāo)準(zhǔn)見表24-3。

表24-3 遲發(fā)型皮膚反應(yīng)試驗(yàn)的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

反應(yīng)程度皮內(nèi)試驗(yàn)斑貼試驗(yàn)
無反應(yīng)或小于對照無反應(yīng)或小于對照
僅有紅腫輕度經(jīng)腫,搔癢
++紅腫伴硬結(jié)明顯紅腫,時(shí)有紅斑
+++紅腫,硬結(jié),水皰紅腫伴豆疹,水皰
++++大皰或(和)潰瘍紅腫,水皰伴潰瘍

有時(shí)候,機(jī)體對某變應(yīng)原可能同時(shí)存在多種類型的反應(yīng)。例如在做青霉素皮內(nèi)試驗(yàn)時(shí),30min內(nèi)觀察呈陰性反應(yīng),但在5~8h可能會出現(xiàn)Ⅲ型變態(tài)反應(yīng),反應(yīng)的外觀現(xiàn)象介于Ⅰ型與Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)之間;甚至還可能出現(xiàn)型變態(tài)反應(yīng)。

3.假性結(jié)果在一定條件下,皮膚反應(yīng)的結(jié)果可能與機(jī)體的實(shí)際情況不符,即出現(xiàn)假陽性或假陰性等不真實(shí)的結(jié)果。

出現(xiàn)假陰性的常見原因有:①試驗(yàn)抗原的濃度過低,或者因各種原因失效;②試驗(yàn)時(shí)正服用免疫抑制劑或抗組胺藥物(后者可通過設(shè)立組胺陽性對照而判斷出來;③操作誤差,例如皮內(nèi)試驗(yàn)時(shí)注射過深進(jìn)入皮下,注入抗原量過少等;④皮試季節(jié)選擇不當(dāng),例如花粉季節(jié)過后,抗花粉抗體水平可下降。

出現(xiàn)假陽性的常見原因有:①試驗(yàn)抗原不純,在提取、配制,甚至在試驗(yàn)過程中被其他抗原污染,引起交叉反應(yīng);②試驗(yàn)溶液配制不當(dāng),過酸或過堿都會對皮膚產(chǎn)生非特異性刺激;③皮膚反應(yīng)性過強(qiáng),例如被試者患有皮膚劃痕癥,或者有既往過敏的痕跡等;④操作不當(dāng),例如注入少量空氣也可出現(xiàn)假陽性。

四、應(yīng)用與評價(jià)

皮膚試驗(yàn)屬于活體試驗(yàn),雖然影響因素眾多,卻能反應(yīng)機(jī)體各種因素綜合作用的實(shí)際免疫狀態(tài);并且簡單易行,結(jié)果的可信度大;這些優(yōu)點(diǎn)是其他方法難以替代的,所以在臨床和防疫工作中都經(jīng)常應(yīng)用。

1.尋找變應(yīng)原變態(tài)反應(yīng)防治的重要原則之一是回避變應(yīng)原,而回避的前提是明確變應(yīng)原,確定變應(yīng)原的常用方法便是各種類型的皮膚試驗(yàn)。例如支氣管哮喘蕁麻疹等均可用皮膚試驗(yàn)來。但食物過敏與皮膚試驗(yàn)的相關(guān)性較差,這可能是因?yàn)槭澄锏目乖崛∫号c腸吸收的物質(zhì)有所不同,或食物過敏并非IgE所介導(dǎo);而且,食物過敏的變應(yīng)原容易發(fā)現(xiàn),一般不必作皮膚試驗(yàn)。

2.預(yù)防藥物或疫苗過敏對患者首次注射某批號的青霉素、鏈霉素或其它易過敏藥物之前,必須做過敏試驗(yàn);如果患者呈陽m.52667788.cn/shiti/性反應(yīng)(即使是可疑陽性),就應(yīng)更換其他抗生素。注射導(dǎo)種抗血清(例如抗傷風(fēng)血清和抗狂犬病血清)前也必須做過敏試驗(yàn),如果呈陽性反應(yīng)就需要換用精制抗體;或進(jìn)行脫敏治療(少量多次注射,使抗原逐漸中和血液中的抗體)。

3.評價(jià)宿主細(xì)胞免疫狀態(tài)在可疑免疫缺陷病、腫瘤或器官移植進(jìn),了解患者的細(xì)胞免疫狀態(tài)對疾病診斷和預(yù)后判斷都有重要意義。這種情況下可以使用共用抗原結(jié)核菌素(OT或PPD)或雙鏈酶(SD-SK)進(jìn)行皮膚試驗(yàn);或使用人工合成的二硝基氯苯(DNCB)或二硝基氟苯(DNFB)等先進(jìn)行致敏再作皮膚試驗(yàn),這樣可消除抗原接觸史不同所致的誤差。

4.傳染病的診斷對某些可疑的傳染病,用某種病原體的特異性抗原進(jìn)行皮膚試驗(yàn)可以起到診斷或鑒別診斷的作用。例如對布氏菌病和軟下疳等細(xì)菌感染、對某些病毒感染和真菌感染、以及某些寄生蟲感染均有一定的意義。

另外,還有一些反應(yīng)機(jī)制不同于變態(tài)反應(yīng)的中和性皮膚試驗(yàn),例如診斷白喉的錫克(Schick)試驗(yàn)和診斷猩紅熱的狄克(Dick)試驗(yàn)等。

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