自1983年澳大利亞學者Warren和Marshall報告在人胃粘膜活檢組織中分離出幽門螺桿菌(Helicobacter pylori·Hp)以來,國內外學者對Hp和上消化道,尤其是胃和十二指腸疾病的關系,有關Hp感染的檢測方法等問題進行了大量研究和報道,并取得了一定成果;目前多數學者公認Hp感染與慢性胃炎、消化性潰瘍的發(fā)生、治療及預后有著重要關系,因此研究Hp感染的檢測方法;如何提高Hp感染檢出率,是當前學者研究的熱點,并提出了快速尿素酶藥盒檢測法、活檢胃粘膜印片法及病理切片各種染色光鏡檢查法、血液Hp培養(yǎng)法、抗Hp抗體檢測法,尿素酶呼吸試驗法、聚合酶鏈反應(PCR)擴增尿素酶A或B基因檢測法等;但上述方法中,有些價格昂貴、操作復雜,有些費時費事,故很難在廣大基層醫(yī)院推廣。本研究的目的在于對一般基層醫(yī)院能開展的快速尿素酶法、胃粘膜印片法、病理切片染色檢查法進行對比研究,試圖尋找出能提高Hp感染陽性檢出紗的互補方法,并對大津科銳公司生產的快速尿素酶試劑盒進行評價,從而有利于使更多醫(yī)院能對Hp與上消化道疾病的關系進行臨床研究。
1 對象和方法
1.1 對象
本研究組為1995—04~1996—02—01,因具有各種上消化道癥狀到本院消化內科門診就診及在消化內科信婃的病人共100例,其中男73例、女27例,年齡在18歲~80歲,平均年齡44.7歲。經纖維內鏡直觀及活組織病理檢查證實:慢性萎縮性胃炎43例、十二指腸球部潰瘍27例、胃潰瘍3例、病程在0.5a~30a;所有病人均在多所醫(yī)院治療并均正在服用質子泵抑制劑、H2受體阻滯劑,各種鉍劑、中藥,少數病人曾服用過羥氨芐青霉素,痢特靈、慶大霉素等藥物;對上述病人不加選擇全部進入本研究組。
1.2 方 法
首先于胃鏡檢查時均于距幽門口3cm~5cm處取活組織1~2塊,同時用尿素快速檢測法、印片法、病理切片染色法檢查胃粘膜Hp感染情況;其次于病變明顯處取活組織2~4塊做病理組織學檢查,以協(xié)助胃鏡直觀所見做出正確臨床診斷;Hp檢測的三種具體方法是:快速尿素酶法——將兩滴試劑滴入反應板孔中,再將所取的胃粘膜塊放入其中,觀察5min,如變?yōu)榧t色者為陽性,不變色者為陰性(本研究試劑盒由天津科銳公司提供);粘膜印片法——將所取之粘膜用鉗子鉗好,以其粘膜面對準清潔玻片反復印片,待玻片印片處干燥后用1%中性紅染液1~2滴滴于該處,染色5min后蒸餾水緩緩將染液沖去,自然干燥,加蓋玻片封存,在光鏡下可見呈彎曲狀或S狀、紅色幽門螺桿菌(此法先于快速尿素酶法,將印片后的組織再做快速尿素酶檢測用);病理切片染色法——對所取之粘膜先用10%福爾馬林固定、切片、美藍染色、透明中性表封固在光鏡下可見直徑為0.3μm~0.5μm1,長1.0μm~1.5μm,弧形或S形的幽門螺桿菌。
2 結果
本組100例病人快速尿素酶法Hp陽性者31例、粘膜印片法陽性者47例、病理切片美藍染色法陽性者44例,陽性檢出率分別為31%,47%及44%,天津科銳公司提供的快速尿素酶試劑盒檢測Hp結果的病理切片(“金標準”)對比,快速尿素酶法假陰性13例、假陽性2例,印片法+病理檢查法陽性者共50例、陽性檢出率可達50%;詳情見表1。天津科銳公司提供的試劑盒做快速尿素酶試驗在同樣病人檢出Hp感染的陽性率低于印片法及病理檢查法。和后兩種方法比較有一定差異(P<0.05,表1)。
表1 三種方法檢測100例病人胃粘膜Hp感染結果 (n:100)
方 法 | 陽性例數 | 陽性率 |
快速尿素酶法 | 31 | 31% |
粘膜印片法 | 47 | 47% |
病理切片染色法 | 44 | 44% |
三種方法對受檢之100例病人中共5種疾病,其結果不盡相同,但均以十二指腸球部潰瘍Hp感染檢出陽性率最高,快速尿素酶法為40.7%、印片法為63.0%、病理染色為55.6%,平均為53.1%(表2)。
表2 三種方法與五種疾病胃粘膜Hp感染檢出情況
疾病種類 | n | 快速尿素酶法 | 印片法 | 病理美藍染色法 | |||
陽性數 | 陽性率(%) | 陽性數 | 陽性率(%) | 陽性數 | 陽性率(%) | ||
淺表性胃炎 | 24 | 4 | 16.60 | 8 | 33.33 | 7 | 29.16 |
萎縮性胃炎 | 43 | 14 | 32.58 | 20 | 46.51 | 20 | 46.51 |
十二指腸潰瘍 | 27 | 11 | 40.74 | 17 | 62.60 | 15 | 55.55 |
胃潰瘍 | 3 | 1 | 33.33 | 1 | 33.33 | 1 | 33.33 |
胃癌 | 3 | 1 | 33.33 | 1 | 33.33 | 33.33 |
3 討論
為進一步研究Hp感染與上消化道一些疾病的關系,提高診斷治療效果,近十多年以來,國內學者在Hp的研究中,對Hp檢測方法的研究十分重視;大量國內外文獻一致認為:快速尿素酶試驗法、血液Hp培養(yǎng)法、活檢胃粘膜切片各種染色光鏡檢查法、抗Hp抗體檢測法、尿素酶呼吸試驗法、聚合酶鏈反應擴增尿素酶基因檢測法,其特異性強、敏感度高可做為檢測Hp感染的“金標準”(Gold Standard)近些年提出的“活檢胃粘膜印片法”,其特異性、敏感性、陽性檢出率也較高,可在臨床推廣應用;方法雖多,但仍以聚合酶鏈反應擴增尿素酶基因檢測法之特異性、敏感度最高,分別為100%及96%~98%,且可用於唾液、胃液、糞便中Hp檢測。遺憾的是這些方法,價格昂貴、操作持技術復雜、費事費時,難於在基層醫(yī)院廣泛開展。其它方法由於特異性差或敏感性低,故其陽性檢出率低,甚致出現(xiàn)假陰性或假陽性。張家濱等在1603例快速尿素酶檢測中慢性胃炎陽性率為55%和賈博琦報告的54.7%近似(其中慢性淺表性胃炎的陽性率為49.7%),十二指腸潰瘍的陽性率為79.1%,胃潰瘍的檢出率為77.8%,胃癌的陽性檢出率為51.9%(14/27);高國藩等對1800例病人中用活檢胃粘膜印片法檢測中慢性淺表性胃炎陽檢出率為23.0%,萎縮性胃炎為51.5%,十二指腸潰瘍?yōu)?9.0%、胃潰瘍?yōu)?9.7%;徐朝斌等在對386例胃粘膜病理切片用銀染色法檢測其Hp,總檢出率為70.5%,其中慢性活動性胃炎為97.6%,非活動性胃炎為56.71%。上述國內文獻報告的這三種方法,尤其是快速尿素酶檢測法,其特異性、敏感性及陽性檢出率均不夠理想。本文對這三種方法對比研究結果顯示其陽性檢出率更低,快速尿素酶法僅為31%,胃粘膜印片法為47%,病理切片法(美藍染色)為44%;分析其原因主要有三;一是本組100例病人均是在服用質子泵抑制劑、H2受體阻滯劑、各種鉍劑、痢特靈、慶大霉素及中藥的同時進行的檢查,而不是在停藥1個月后再做檢查、更不是初診從未接受過治療的人,眾所周知上述藥物均有不同程度的抗Hp作用,而檢查時病人正處于胃粘膜Hp感染被清除的階段,故陽性檢出率低(國內上述文獻報道對此問題均未做交待);二是Hp在胃竇分布多呈灶性分布,每次取材不一定能準確的把隱藏Hp的粘膜都取出,也會影響Hp檢出率;三是本組中十二指腸潰瘍Hp檢出率是最高的,這也會影響本組陽性檢出率,但從三種方法檢查結果來看其陽性率和國內外文獻報道也有相同之處,即尿素酶檢測法陽性率低于胃粘膜印片檢檢查法和胃粘膜印片檢查法的陽性率;本文病理切片檢查法和胃粘膜印處近似,并不高于胃粘膜印片法是與病理切片染色方法有關,即本文病理切片不是銀染色、而是美藍染色。另外從本組1m.52667788.cn/shiti/00例檢查結果來看三種方法均呈現(xiàn)十二指腸潰瘍者Hp檢出率最高,依次為慢性胃炎、胃潰瘍及胃炎,這些結果和國內外報道也一致。綜合上述我們認為:一、天津科銳公司生產的快速素酶試驗劑盒是可以推廣應用的,二、為在基層小醫(yī)院能更好的開展Hp感染與上消化道疾病關系的研究,還應推出一種能提高Hp陽性檢出率、且能在小醫(yī)院開展的互補檢測法。
Hp感染與上消化道疾病關系的研究將是二十一世紀研究的熱點,但使用特異性、敏感性、陽性率高的一此復雜昂貴的技術,僅能在少數較大醫(yī)院及研究機構開展是遠遠不夠的;只有在眾多的基層小醫(yī)院開展并有更多的消化科醫(yī)師參加,才能加快研究速度、更早的高搞清Hp感染和上消化道疾病的關系。為此我們提出如下設想,供同行考慮;一是對每例病人最好都做二種或三種本文提出的方法,如同時采用快速尿素酶檢測法及胃粘膜印片法,爭取病理切片銀染法以進行互補檢查,把二種或三種檢查所檢出的Hp真陽性率相加去提高檢出率——即互補檢查法。二是鑒于胃粘膜中Hp感染的灶分布特點,建議在做快速尿素酶法檢查時每例病人在胃竇不同部位最少取兩塊活m.52667788.cn/yaoshi/組織,可能有望提高其陽性檢出率,三是請生產快速尿素酶檢查試劑盒的廠家進一步在如何提高藥盒的敏感染度上下功夫進行改進,也有可能提高Hp感染陽性檢出率,如能在消除假陽性上做一改進則更好;以上是通過本組研究后的想法,是否恰當,需進一步研究。