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大量研究證實(shí)，應(yīng)激不僅與多種軀體疾病的發(fā)生密切相關(guān)[1]，還是許多精神障礙如抑郁癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙等發(fā)病的主要危險(xiǎn)因素[23]。心理、生理和環(huán)境應(yīng)激源作用于機(jī)體，通過(guò)興奮下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸(hypothalamicpituitaryadrenal axis, HPA)和交感神經(jīng)-腎上腺髓質(zhì)軸(sympathoadreno medullary, SAM)產(chǎn)生生理病理性改變，對(duì)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的平衡產(chǎn)生威脅[4]。有研究證實(shí)，兩軸協(xié)調(diào)性的交互作用可明顯改善機(jī)體面對(duì)各種應(yīng)激源時(shí)的生理狀態(tài)，降低其活動(dòng)可提高應(yīng)激動(dòng)物的存活率[5]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)應(yīng)激前給予腎上腺受體拮抗劑哌唑嗪和普萘洛爾改變SAM軸的功能，通過(guò)慢性輕度不可預(yù)知模型(chronic unprodictable mild stress, COMS)觀察不同腎上腺素能受體拮抗劑對(duì)大鼠行為學(xué)、血清皮質(zhì)酮水平(corticosterone, CORT)和中樞海馬中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表達(dá)的影響，探討其應(yīng)激保護(hù)作用的差異。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性Wistar大鼠，2月齡，體質(zhì)量200～220?g，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，室溫(20±3)℃，光—暗周期12?h/12?h，濕度40%～70%。
1.2 儀器與試劑 MGB型迷宮刺激器(江蘇三興教學(xué)機(jī)械廠);鹽酸普萘洛爾片(天津力生制藥股份有限公司);鹽酸哌唑嗪片(北京雙鶴現(xiàn)代醫(yī)藥技術(shù)有限責(zé)任公司);血清皮質(zhì)醇放射性免疫試劑盒(南京建成生物技術(shù)公司);兔抗iNOS多克隆抗體(SANTA CRUZ公司)，兔抗βactin多克隆抗體(SANTA CRUZ公司);辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司);PVDF膜(0.45?μm，Millipore公司)。
1.3 動(dòng)物分組及處理 利用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)總得分低于30分和高于120分的動(dòng)物予以剔除，選擇得分相近大鼠32只，按隨機(jī)原則分為4組：對(duì)照組8只，正常飼養(yǎng)，生理鹽水1.0?mL灌胃;CUMS模型組8只，按程序給予應(yīng)激刺激，應(yīng)激前半小時(shí)生理鹽水1.0?mL灌胃;普萘洛爾組8只，將鹽酸普萘洛爾片[10?mg/(kg·d)]溶于1.0?mL生理鹽水中，每天于應(yīng)激前半小時(shí)灌胃;哌唑嗪組8只，將鹽酸哌唑嗪片[1?mg/(kg·d)]溶于1.0?mL生理鹽水中，每天于應(yīng)激前半小時(shí)灌胃。
1.4 模型制備 ①慢性輕度不可預(yù)知性應(yīng)激模型：在21?d內(nèi)，除對(duì)照組所有大鼠隨機(jī)接受7種不同的刺激：禁水(24?h);禁食(24?h);夾尾(1?min);晝夜顛倒24?h;水平振蕩(1次/s,總15?min);噪音(1?500?Hz,92?dB,1?h);束縛(將大鼠置于25?cm×7?cm的塑料箱子內(nèi)，持續(xù)1?h)，每種刺激在21?d內(nèi)出現(xiàn)3次。每天給予一種刺激，給予的時(shí)間也是隨機(jī)安排，以保證應(yīng)激在時(shí)間和方式上的不可預(yù)知性。②急性應(yīng)激模型：第22天，模型建立結(jié)束后，所有大鼠接受電擊刺激：電流為1.0?mA，持續(xù)刺激5?s,間歇55?s，共60次[6]。
1.5 行為學(xué)測(cè)定 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)裝置為一底面100?cm×100?cm，高40?cm的木箱，底面被等分為25個(gè)正方形方格。于實(shí)驗(yàn)第1、7、22天的7：30～l2：00之間在安靜、光線均勻的房間內(nèi)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后，將大鼠放于中央方格內(nèi)觀察大鼠的中央格停留時(shí)間，5?min內(nèi)的穿越格數(shù)(四爪均進(jìn)入的方格方可計(jì)數(shù)，水平運(yùn)動(dòng)得分)，直立次數(shù)(雙前爪騰空或攀附墻壁，垂直運(yùn)動(dòng)得分)，清潔運(yùn)動(dòng)次數(shù)，糞便顆粒數(shù)。用5%的酒精清潔曠場(chǎng)后再進(jìn)行下一只大鼠的觀測(cè)醫(yī).學(xué).全.在.線m.52667788.cn。
