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1.6 血清CORT測定 每組大鼠接受急性應(yīng)激后2?h[7]?斷頭處死，取血，3?000?r/min離心10?min，取上清，放射免疫分析法測定血清皮質(zhì)醇含量。皮質(zhì)酮含量由皮質(zhì)醇測定值換算得來，換算公式：血清皮質(zhì)酮濃度=血清皮質(zhì)醇濃度×50(原理：皮質(zhì)酮是嚙齒類動(dòng)物主要的糖皮質(zhì)激素，大鼠血清皮質(zhì)酮含量與皮質(zhì)醇含量比恒定，約為50∶1)
1.7 Western blot檢測iNOS蛋白表達(dá) 動(dòng)物斷頭處死后，在冰面上剝離大鼠海馬組織，置-80?℃保存。將組織按比例加入裂解液RIPA(50?mmol Tris, 150?mmol NaCL, 0.1% SDS, EDTA等)和PMSF的混合液，勻漿，4?℃，12?000?r/min 離心10?min,離心半徑為9.13?cm,留取上清液。用BCA蛋白質(zhì)定量測定試劑盒測定蛋白濃度。按每孔25?μg蛋白上樣行SDSPAGE凝膠電泳，蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用5%脫脂牛奶室溫封閉1?h，加入兔抗iNOS多克隆抗體(1∶800),4?℃孵育過夜。辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(1∶10?000)室溫孵育1?h, 洗膜3次后，加ECL暗室曝光1～5?min，顯色條帶用Scion Image軟件進(jìn)行灰度分析。以βactin作為內(nèi)參，目的蛋白條帶與βactin條帶灰度值比值代表目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。
1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件行單因素方差分析及Sigmaplot10.0畫圖。數(shù)據(jù)以±s表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié) 果醫(yī).學(xué).全.在.線m.52667788.cn
2.1 曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果 21?d CUMS造模結(jié)束后，與對(duì)照組比較，CUMS組中央格停留時(shí)間延長，豎立次數(shù)減少(P<0.05)，水平穿越格數(shù)明顯減少(P<0.01);普萘洛爾組水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)和清潔運(yùn)動(dòng)次數(shù)減少(P<0.05);哌唑嗪組與對(duì)照組各指標(biāo)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與CUMS組比較，普萘洛爾組修飾次數(shù)減少(P<0.05)，水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)增加，中央格停留時(shí)間和糞便顆粒數(shù)減少，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;哌唑嗪組中央格停留時(shí)間減少，豎立次數(shù)增加(P<0.05)，水平穿越格數(shù)明顯增加(P<0.01)。普萘洛爾組與哌唑嗪組比較，水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)和修飾次數(shù)減少(P<0.05)。見表1。中央格停留(t/s)穿越格數(shù)豎立次數(shù)修飾次數(shù)糞便粒數(shù)對(duì)照組
2.2 血清皮質(zhì)酮測定結(jié)果 與對(duì)照組比較，CUMS組和普萘洛爾組CORT水平呈下降趨勢，哌唑嗪組CORT水平呈上升趨勢，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。普萘洛爾組血清CORT水平顯著低于哌唑嗪組(P<0.05)。
