| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1306961C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2007.03.28 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510041858.3 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.03.19 |
| 專利名稱 | 四價(jià)輪狀病毒滅活疫苗的制備及應(yīng)用 |
| 主分類號(hào) | A61K39/15(2006.01)I |
| 分類號(hào) | A61K39/15(2006.01)I;A61P31/14(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 蘭州生物制品研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 周 旭 |
| 地址 | 730046甘肅省蘭州市城關(guān)區(qū)鹽場(chǎng)路178號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 蘭州中科華西專利代理有限公司 |
| 代理人 | 王學(xué)定 |
| 國(guó)省代碼 | 甘肅;62 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種四價(jià)輪狀病毒滅活疫苗的制備方法，包括以下工藝步驟：①細(xì)胞的制備：將小牛腎細(xì)胞或Vero細(xì)胞用胰酶消化分散，加入D-MEM完全培養(yǎng)液在37℃培養(yǎng)至細(xì)胞成片，再用無(wú)血清D-MEM培養(yǎng)液清洗細(xì)胞，用于接種輪狀病毒；②病毒接種和培養(yǎng)：將G1型、G2型、G3型、G4型輪狀病毒毒種加入10～15ug/ml胰酶，于37℃消化45分鐘，以感染復(fù)數(shù)為5～10將G1型、G2型、G3型、G4型輪狀病毒分別接種到步驟①制備的細(xì)胞，并在36.5-37.5℃吸附40～60分鐘后吸棄病毒液，再用含1～1.5ug/ml胰酶的無(wú)血清D-MEM培養(yǎng)液于33～35℃培養(yǎng)至細(xì)胞出現(xiàn)明顯病變時(shí)終止；③病毒收集、濃縮和純化：將上述接種的各病變細(xì)胞凍融，高速離心后收集上清液得各病毒原液；通過(guò)超濾濃縮上述病毒原液，并以蔗糖密度梯度離心或柱層析純化病毒后即為各單價(jià)病毒原液；④病毒滅活：采用0.05％福爾馬林或1∶4000β-丙內(nèi)酯滅活上述各單價(jià)病毒，除菌過(guò)濾后即為單價(jià)疫苗原液；⑤混合上述各單價(jià)疫苗原液；⑥成品的配制：將經(jīng)混合的單價(jià)疫苗原液加入適量的氫氧化鋁，即為成品。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種四價(jià)輪狀病毒滅活疫苗的制備方法，該方法將胰酶消化分散的小牛腎細(xì)胞或Vero細(xì)胞培養(yǎng)成片后以不同的感染復(fù)數(shù)分別接種G1、G2、G3、G4型輪狀病毒，用無(wú)血清D-MEM培養(yǎng)液至細(xì)胞出現(xiàn)明顯病變后收獲病毒液并經(jīng)濃縮、純化、滅活、混合后加入適量的氫氧化鋁制備而成。本發(fā)明制備的四價(jià)輪狀病毒滅活疫苗經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明具有良好的免疫原性；經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)、病毒滴定、滅活試驗(yàn)、總蛋白含量、硫柳汞含量、氫氧化鋁含量、效力測(cè)定、熱穩(wěn)定性試驗(yàn)、異常毒性檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查等檢定完全合格，主要用于預(yù)防嬰幼兒輪狀病毒感染性疾病。 |
| 國(guó)際公布 |
