| 公開(公告)號 | CN1552890A |
| 公開(公告)日 | 2004.12.08 |
| 申請(專利)號 | CN200310112672.3 |
| 申請日期 | 2003.12.18 |
| 專利名稱 | 結(jié)締組織生長因子C區(qū)抗原的制備方法 |
| 主分類號 | C12P21/00 |
| 分類號 | C12P21/00;C12P19/34 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 東南大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 劉乃豐;吳國球 |
| 地址 | 210096江蘇省南京市四牌樓2號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 |
| 代理人 | 王之梓 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 |
一種結(jié)締組織生長因子C區(qū)抗原的制備方法，其特征在于第一步：用NheI和XbaI酶對pCOMB3載體進行雙酶切，切除兩酶切位點NheI和XbaI之間的272bp條帶后的載體用T4DNA連接酶自連后轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，然后，以質(zhì)粒pET-28(a)+作模板，分別以p1：5’-GG |
| 摘要 | 結(jié)締組織生長因子抗原的制備方法，對pCOMB3載體雙酶切，切除272bp條帶后的載體用T4 DNA連接酶自連后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，以pET-28(a)+作模板擴增，回收550bp條帶，將其與切除后的pCOMB3載體連接，經(jīng)轉(zhuǎn)化后篩選得陽性質(zhì)粒；對人內(nèi)皮細胞原代培養(yǎng)，用牛血清白蛋白對其干預8h，胰蛋白酶消化，用Trizol法提取RNA，合成cDNA，在1.5ml管中加入：ddH2O 31.5μl，10×Taq buffer5μl，10mol/L dNTP 1μl，25pmol/μl的引物，0.65μg/μl的cDNA模板10μl，5U/μl的TaqPlus0.5μl，94℃5min變性，94℃1min，65℃30sec，72℃1min，35個循環(huán)，72℃延伸10min，4℃保溫下擴增，對PCR產(chǎn)物與陽性質(zhì)粒雙酶切后，用T4DNA連接酶相連兩個片段，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，得pKMcl；將pKMcl的大腸桿菌單菌落擴增，用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷37℃誘導3h，得大腸桿菌，超聲破碎，層析得結(jié)締組織生長因子抗原。 |
| 國際公布 |
