1 儀器
1.1 高壓液相泵
1.2 高壓液相色譜m.52667788.cn/hushi/柱:TSKG3000SW(直徑7.5mm,長(zhǎng)60cm)。TSk Guard Column SW(直徑7.5mm,長(zhǎng)7.5cm)。
2 試劑
2.1 貯存液A:0.5mol /L NaH2PO4,pH4.8
稱39g NaH2PQ4·2H2O,用超純水溶解,并稀釋至500ml。
2.2 貯存液B:0.5mol /L Na2HPO4
稱179.1g Na2HPO4·12H2O,用超純水溶解,并稀釋至1000ml。
2.3 工作液C:0.2mol /L 磷酸鹽緩沖液,Ph7.0(含1%異丙醇)
準(zhǔn)確量取200ml貯存液A、420ml貯存液B、914.5ml超純水、15.5ml異丙醇,混勻,用0.45μm水溶性膜過(guò)濾并超聲脫氣。
3 樣品處理
用生理鹽水將樣品稀釋至4mg/ml,然后用0.45μm水溶性膜過(guò)濾。
4 操作
用工作液C以0.6ml/分鐘流速平衡高壓液相系統(tǒng)至基線平穩(wěn)。取處理過(guò)的樣品25μl上柱,用工作液C以0.6ml/分鐘流速洗脫,同時(shí)在紫外檢測(cè)器m.52667788.cn/shouyi/280nm波長(zhǎng)下記錄色譜圖及有關(guān)數(shù)據(jù)。記錄數(shù)據(jù)的時(shí)間為60分鐘。
5 計(jì)算
5.1 人血白蛋白多聚體含量計(jì)算
用高壓液相系統(tǒng)的色譜工作站或積分儀對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,算出多聚體相對(duì)面積百分含量。再根據(jù)轉(zhuǎn)化公式換算成相對(duì)重量百分含量。
轉(zhuǎn)化公式*X(%)=Y-1.6504/1.6359
其中X為凱氏定氮結(jié)果,Y為高壓液相結(jié)果(如Y值小于1.6504,結(jié)果不用轉(zhuǎn)化成重量百分含量,但在試驗(yàn)報(bào)告中需注明為相對(duì)面積百分含量)。
5.2 人血丙種球蛋白中IgG各組份相對(duì)含量計(jì)算。
5.2.1IgG各組份峰的劃界。
圖譜中各峰的界限為兩峰間最低點(diǎn)到基線的垂直線。
5.2.2IgG各組份相對(duì)含量計(jì)算。
用高壓液相系統(tǒng)的色譜工作站或積分儀對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,算出各組份相對(duì)百分含量。
*應(yīng)根據(jù)各單位使用的HPLC儀器及層析柱型號(hào),經(jīng)試驗(yàn)后得出轉(zhuǎn)化公式。