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中國(guó)生物制品規(guī)程:皮上劃痕人用炭疽活菌苗制造及檢定規(guī)程

本品系用弱毒炭疽菌株制成的活芽胞懸液。專供預(yù)防炭疽病之用。1 菌種1.1 菌種來源為無莢膜,水腫型,具有一定殘余毒力,免疫原性較好的A16R菌株。由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。1.2菌種應(yīng)以凍干法或用50%(ml/ml)甘油保存。每3~5年應(yīng)全面檢定其培養(yǎng)特性、殘余…

本品系用弱毒炭疽菌株制成的活芽胞懸液。專供預(yù)防炭疽病之用。

1 菌種

1.1 菌種來源

為無莢膜,水腫型,具有一定殘余毒力,免疫原性較好的A16R菌株。由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。

1.2菌種應(yīng)以凍干法或用50%(ml/ml)甘油保存。每3~5年應(yīng)全面檢定其培養(yǎng)特性、殘余毒力、安全性及免疫力,建立種子批。生產(chǎn)前只檢查菌形,培養(yǎng)特性及噬菌體特異性。

1.3菌種檢定

1.3.1 培養(yǎng)及生化特性

牛肉消化液瓊脂或其他適宜固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng),菌落為灰白色,不透明,呈卷發(fā)狀。為革蘭氏陽性大桿菌,呈鏈狀排列。無運(yùn)動(dòng)力。能夠形成芽胞。液體培養(yǎng)呈絮狀發(fā)育,在血清培養(yǎng)基上不形成莢膜。能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖,不分解水楊苷。

1.3.2 殘余毒力試驗(yàn)

用體重350~400g健康豚鼠5只,各皮下注射0.5億/ml的牙包懸液1ml。另用體重18~20g小白鼠5只,各皮下注射0.5億/ml的芽胞懸液0.1ml。觀察10天,3只以上動(dòng)物應(yīng)出現(xiàn)水腫,可有特異死亡。但臟器涂片只應(yīng)找到無莢膜的本菌。若全部動(dòng)物不出現(xiàn)水腫,應(yīng)重試。重試仍無水腫,菌種不得用于生產(chǎn)。

1.3.3 安全試驗(yàn)

用體重2.0~2.5kg分健康家1m.52667788.cn/yishi/0只,各皮下注射2.5億/ml的芽胞懸液1ml,觀察10天,在注射部位可出現(xiàn)水腫,全部動(dòng)物應(yīng)活存。如有死亡,應(yīng)用同數(shù)動(dòng)物重試,重試仍有死亡,菌種不得用于生產(chǎn)。

1.3.4 免疫力試驗(yàn)

上述安全試驗(yàn)動(dòng)物于注射后18~20天,用炭疽毒菌攻擊,各皮下注射20個(gè)MLD。同時(shí)用同體重的健康家兔3只,各皮下注射1個(gè)MLD作為對(duì)照。觀察10天,對(duì)照動(dòng)物死亡3只。試驗(yàn)組保護(hù)60%;對(duì)照組死亡2只,試驗(yàn)組保護(hù)80%為合格。對(duì)照動(dòng)物死亡1只或無死亡,為對(duì)照不成立,應(yīng)重試。

2 制造

制造菌苗的工作室及設(shè)備應(yīng)當(dāng)專用,不得與其他細(xì)菌工作混用。生產(chǎn)中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作,非制造菌苗用的其他炭疽菌株不得帶到生產(chǎn)工作室內(nèi)。

2.1 菌種

接種牛肉消化液瓊脂或其他適宜固體培養(yǎng)基,于34℃培育18~20小時(shí),經(jīng)檢查為純菌者,保存于2~8℃,在2周內(nèi)供作生產(chǎn)種子用。

2.2 培養(yǎng)基

用pH7.2~7.4牛肉消化液瓊脂或其他培養(yǎng)基。

2.3 種子

將供制造用菌種,移種于牛肉消化液中。于34℃培育20~24小時(shí),檢查其生長(zhǎng)特性、菌形及純度,應(yīng)符合1.3.1項(xiàng)要求。

2.4 接種

經(jīng)檢查合格之種子培養(yǎng)物,接種于牛肉消化液瓊脂上,置33~34℃培育。成熟的典型芽胞達(dá)至80%以上、無雜菌者采集。

2.5 采集

將培養(yǎng)物刮入50%(ml/ml)甘油蒸餾水原液瓶?jī)?nèi),振搖使成均勻懸液。每瓶取樣按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行純菌試驗(yàn)。

2.6 合并

將純菌試驗(yàn)合格之原液進(jìn)行合并分批,取樣做純菌試驗(yàn)、濃度測(cè)定及活菌計(jì)數(shù)。

2.6.1 純菌試驗(yàn)

按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。

2.6.2 濃度測(cè)定

按中國(guó)細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定濃度。

2.6.3 活菌計(jì)數(shù)

取0.5億/ml的菌液1ml,按10倍系列稀釋至10-5。取10-5稀釋菌液接種5個(gè)平皿,每個(gè)平皿接種0.1ml。置37℃培育24小時(shí),計(jì)算每ml菌苗的芽胞活存率。芽胞活存率在50%以上為合格。

2.7 稀釋分裝

2.7.1 稀釋

用滅菌的50%甘油蒸餾水將原液稀釋成每ml含芽胞40億個(gè),即為皮上劃痕用菌苗。同批原液稀釋之菌苗為作1批。稀釋若干大瓶時(shí),應(yīng)按瓶號(hào)分為亞批。

2.7.2 分裝

皮上劃痕用菌苗按20人份/ml分裝。規(guī)格為每安瓿1或2ml,抽樣進(jìn)行成品檢定。

3 成品檢定

3.1 物理檢查

應(yīng)為灰白色之均勻懸液,無異物及搖不散之菌塊。

3.2 純菌試驗(yàn)

按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。

3.3 濃度測(cè)定

按中國(guó)細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定濃度,應(yīng)為每ml含菌40億±20%

3.4 活菌計(jì)數(shù)

按2.6.3項(xiàng)進(jìn)行。

3.5 安全試驗(yàn)

每批菌苗用體重2.0~2.5kg,健康家兔5只,各皮下注射2.5億/ml的芽胞懸液1ml。觀察10天?捎兴[,全部動(dòng)物應(yīng)活存。如有死亡,m.52667788.cn/job/應(yīng)用加倍量動(dòng)物重試。如仍有死亡,判為不合格。

3.6 免疫力試驗(yàn)

每5批菌苗或不足5批者,至少抽檢1批(可利用安全試驗(yàn)的動(dòng)物)按1.3.4項(xiàng)進(jìn)行。

4 保存與效期

應(yīng)保存于2~8℃。自檢定合格之日起效期為2年。

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